DESARROLLO DE UNA PCR MULTIPLEX CON TECNOLOGÍA KASP PARA DETECTAR LAS TRANSLOCACIONES DE CENTENO 1AL/1RS Y 1BL/1RS EN TRIGO PAN.

GHIONE C.; LOMBARDO L.; VANZETTI L.

Tres Arroyos

Congreso; IX Congreso Nacional de Trigo; 2021

El desarrollo de marcadores funcionales es un paso clave para la selección asistida por marcadores moleculares en los programas de mejoramiento. En particular, los marcadores KASP, que corresponden a una tecnología de genotipificación usando fluorescencia, ofrecen una manera simple de detección de SNPs. En trigo pan, a nivel mundial, las translocaciones de centeno 1AL/1RS y 1BL/1RS han sido ampliamente difundidas ya que aportan diversos genes de resistencia a estreses bióticos y abióticos. En Argentina particularmente, la translocación 1BL/1RS ha sidosignificativamente más difundida que la 1AL/1RS, sin embargo, ambas pueden ser detectadas envariedades comerciales de trigo pan. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una PCR multiplexcon tecnología KASP que detecte SNPs específicos de las translocaciones 1AL/1RS y 1BL/1RS.Primeramente, se desarrollaron nuevos cebadores para detectar la translocación 1AL/1RS(G093900) ya que los cebadores de trabajos previos (wMAS000010) mostraban algunasinconsistencias. Para este desarrollo se utilizó la información de mutaciones identificadas mediante captura de exones sobre el gen TraesCS1A02G093900, localizado dentro del segmento translocado, en genotipos portadores de la translocación 1AL/1RS, genotipos portadores de 1BL/1RS y la referencia Chinese Spring que no posee translocaciones de centeno. Para el diseño de los cebadores específicos también se utilizaron las secuencias de los homeólogos de los genomas B y D de la referencia (TraesCS1B02G122000 y TraesCS1D02G102500). La mutación elegida para eldesarrollo de los cebadores específicos fue en la posición 2988A>G donde la G se encuentraúnicamente en el genotipo de centeno donor del brazo cromosómico introducido en el cromosoma1A de trigo y no en el genotipo de centeno donor del segmento introducido en el cromosoma 1B, nien ninguno de los tres genes propios de trigo. Luego, para la realización de la PCR multiplex seutilizaron los siguientes cebadores: el cebador específico para el alelo de centeno (G) para latranslocación 1AL/1RS (G093900), el cebador específico para el alelo de centeno (A) para latranslocación 1BL/1RS (wMAS000011) y los dos cebadores reversos para ambas translocaciones.Para la puesta a punto se emplearon ADNs de tres variedades/líneas con la translocación 1AL/1RS,de seis variedades con la translocación 1BL/1RS y de cuatro variedades que no poseen ninguna deestas dos translocaciones; para detectar 1AL/1RS-1BL/1RS se combinaron ADNs de las anterioresvariedades. Se observó que la PCR multiplex permite separar los genotipos que poseen latranslocación 1AL/1RS, los genotipos que poseen la translocación 1BL/1RS y los genotipos queposeen ambas translocaciones 1AL/1RS-1BL/1RS, además de separar aquellos genotipos que noposeen ninguna de estas dos translocaciones. Por lo tanto, se dispone de cebadores para poderrealizar las PCRs para detectar cada translocación por separado u optar por realizar la PCRMultiplex. Además, estos marcadores posibilitan el desarrollo de genotipos de trigo portadores deambas translocaciones de centeno simultáneamente y quizás potenciar los aportes realizados porambos segmentos para caracteres de interés.