Relación funcional entre proteínas de superficie de Listeria monocytogenes y el factor sigma SigB

JUAN J. QUEREDA; JAVIER FERNANDO MARISCOTTI; FRANCISCO GARCÍA-DEL PORTILLO; M. GRACIELA PUCCIARELLI

Palma de Mallorca

Congreso; IX Reunión del Grupo de Microbiología Molecular de la SEM; 2012

Sociedad Española de Microbioloía

Introducción: Listeria monocytogenes es la bacteria patógena causante de la listeriosis, una enfermedad grave en humanos. L. monocytogenes es un patógeno intracelular Gram-positivo capaz de atravesar el epitelio intestinal, la placenta, o la barrera hematoencefálica. Las especies del género Listeria poseen un alto número de genes que codifican proteínas de superficie con motivos LPXTG de unión covalente a peptidoglicano. El repertorio de proteínas LPXTG en todas las cepas y especies de genoma secuenciado se mantiene en torno a 40-45, según la cepa secuenciada. Nuestros ensayos de proteómica realizados en la cepa EGDe de L. monocytogenes identificaron en extractos de peptidoglicano un total de 25 proteínas de las 41 que codifica su genoma. Algunas de estas 41 proteínas LPXTG han sido asociadas a virulencia como Internalina-A (Inl-A), Vip y LapB. La comparación genómica ha revelado que aproximadamente un tercio de las LPXTG presentes en las especies patogénicas de Listeria están ausentes en las especies no patogénicas de Listeria. La función biológica de muchas estas LPXTG se desconoce. Nuestro objetivo es determinar la función en virulencia de proteínas de esta extensa familia de proteínas. Métodos: En el marco de un consorcio europeo, se ha construido una colección completa de mutantes deficientes en cada una de las proteínas LPXTG conocidas en la estirpe EGDe, así como generado anticuerpos específicos para dichas proteínas. Se han realizado análisis proteómicos sobre material de peptidoglicano obtenido de estos mutantes. Resultados: El análisis proteómico realizado ha demostrado que en los mutantes lmo0262 (inlG) y lmo0320 (vip) se produce un descenso notable en los niveles de otras cuatro proteínas LPXTG, en concreto Lmo0263, Lmo0610, Lmo0880 y Lmo2085. Estas cuatro proteínas están reguladas por el factor sigma alternativo SigB, el cual responde a señales de estrés oxidativo, osmótico, pH y ayuno nutricional. La secuenciación completa del genoma de los mutantes lmo0262 (inlG) y lmo0320 (vip) reveló la presencia de mutaciones en los genes de la cascada de regulación de SigB, en concreto en los genes rsbU y rsbV respectivamente. Conclusiones: Nuestro modelo de trabajo implica una relación funcional entre InlG y Vip y el aparato de respuesta a estrés (conocido como li"estresosoma"), el cual se activa por mecanismos que actúan a nivel de cascadas de fosforilación que desencadenan en una proteína inhibidora de SigB. En la actualidad estamos intentando elucidar las bases moleculares de la conexión entre proteínas de pared (InlG y Vip) y la reprogramación transcripcional derivada de la disponibilidad del factor Sigma B. Para ello estamos generando una cantidad suficiente de mutantes lmo0262 (inlG) y lmo0320 (vip) para demostrar que la pérdida de estas dos proteínas de superficie fuerza la pérdida de función en algún elemento de la cascada de activación de SigB. De confirmarse, propondríamos a InlG y Vip como proteínas que actúan de ‘freno’ sobre el sistema de regulación mediado por SigB.