Estandarización de modelos in vitro e in vivo para evaluación fenotípica de compuestos reposicionados con actividad anti-Trypanosoma cruzi

GULIN, JEN; BISIO, M; ROCCO, DM; ALTCHEH, J; SOLANA, MARÍA ELISA; GARCÍA BOURNISSEN, F

Buenos Aires

Jornada; VII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2017

Secretaría Ciencia y Técnica - FCV - UBA

El aislamiento de poblaciones circulantes de Trypanosoma cruzi en diferentes regiones y hospedadores demostró diversidad genética, inmunológica y de sensibilidad a los fármacos. Se caracterizaron las propiedades molecularesy biológicas más relevantes de un aislamiento denominado VD, obtenido a partir de un caso de infección congénita. Posteriormente se realizó el cribaje fenotípico de drogas reposicionadas. Mediante PCR dirigida a secuencias de genesnucleares se determinó que VD pertenece a la Unidad Discreta de Tipificación TcVI. Se estableció la sensibilidad in vitro a benznidazol (BZ) y nifurtimox (NFX), siendo la concentración lítica 50 (LC50) en tripomastigotes de 6,19 μMpara BZ y 7,70 μM para NFX, y la concentración inhibitoria 50 (IC50) en amastigotes de 0,24 y 0,66 μM, para BZ y NFX respectivamente. Se estudió el curso de la infección aguda en ratones hembra BALB/c infectadas con 500 tripomastigotes vía intraperitoneal (ip) y la respuesta al tratamiento con BZ o NFX (ambas a 100 mg/kg/día; 20 días vía oral). La parasitemia máxima promedioen el grupo no tratado (NT) fue de 1,54x106 tripomastigotes/mL, mientras que el tratamiento con BZ la redujo en un 88,4% y el NFX en un 93,5%. La sobrevida en el grupo NT fue de 6% y en los grupos tratados, de 100%. Finalizado el tratamiento, los animales sobrevivientes fueron inmunosuprimidos con ciclofosfamida (CYP, 200 mg/kg) ip. La tasa de reactivación en el grupo tratado con BZ fue 66% (8/12) y 50% (6/12) en el grupo tratado con NFX. En un sistema de cribado fenotípico in vitro, se evaluaron 23 compuestos a una concentraciónfija (10 μM) sobre amastigotes y tripomastigotes, estableciéndose el porcentaje de actividad relativa (AR) comparado con BZ y NFX. Quince compuestos exhibieron al menos un 50% de AR, para los que se obtuvo la CL50, CI50, y en simultáneo, la citotoxicidad sobre células eucariontes. Miltefosina (MLT) y pirimetamina (PYR) presentaron valores de CI50= 0,127 y 0,563 μM respectivamente, justificando continuar su evaluación en el modelo murino. Los animales fueron infectados y tratados con MLT a 25, 50, 75 y 100 mg/kg, o con PYR (50 mg/kg) durante 20 días por vía oral. MLT produjo una disminución de la parasitemia dosis dependiente,con 100% de supervivencia en los grupos tratados a partir de 50 mg/kg. Los ratones con parasitemia negativa fueron inmunosuprimidos con CYP, registrándose una reagudización en el 100% de los ratones tratados con MLT. PYR no tuvo efecto sobre la parasitemia y la mortalidad fue de 100%. Estos resultados permitieron definir al aislamiento como una cepa caracterizada y utilizarla en modelos in vitro e in vivo estandarizados para evaluar la actividad tripanocida de varios compuestos. La MLT tendría un efecto parasitostático mientras que PYR no mostró actividad in vivo. Se continuará con estudios en combinación con BZ o NFX ycon el cribado de más compuestos candidatos.