Efecto de benznidazol y nifurtimox en células TM4 y sobre parámetros de movilidad espermática empleando semen bovino

GULIN, E; TORRES, P; MARURI, A; JACOBO, P; THEAS, S; LOMBARDO, DM

CABA

Jornada; VI Jornadas Internacionales Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA).; 2021

Facultad de Ciencias Veterinarias (UBA)

Las opciones terapéuticas para el tratamiento de la enfermedad de Chagas se limitan al Nifurtimox (NFX) y el Benznidazol (BZ). Existe escasa información de los potenciales efectos tóxicos de dichas drogas sobre las gametas y el desarrollo embrionario. Bajo un enfoque 3Rs (reemplazo, reducción y refinamiento), se estableció una plataforma de ensayos in vitro para evaluar la toxicidad reproductiva.El objetivo de este trabajo es determinar el efecto citotóxico de BZ y NFX en la línea TM4 derivada de células de Sértoli murinas y sobre los parámetros de viabilidad y motilidad espermática utilizando como modelo espermatozoides (Zs) bovinos criopreservados, Las células TM4 fueron sembradas en placas de 96 pocillos en medio DMEM, con 10% de suero fetal bovino y 1% de penicilina/estreptomicina y expuestas a concentraciones crecientes (0 ? 500 µM) de NFX ó BZ durante 24 h en estufa de cultivo a 37 °C y 5% de CO2. Posteriormente, se determinó la viabilidad celular mediante el ensayo de reducción del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolium (MTT) en lector de placa a 570 nm, para posteriormente calcular mediante análisis de regresión no lineal la concentración citotóxica 50 (CC50), que indica la concentración de fármaco capaz de reducir la viabilidad celular en un 50% respecto al control sin tratar. Para el estudio del efecto citotóxico de NFX y BZ sobre Zs bovinos, se realizaron alícuotas de 30x106 Zs/mL a partir de pajuelas comerciales de semen de toro almacenadas en nitrógeno, las que fueron expuestas a concentraciones crecientes (0 ? 600 µM) de NFX ó BZ durante 1 h en baño térmico a 37°C. Luego, se evaluaron los parámetros de movilidad y velocidad mediante análisis de semen asistido por computadora (Computer Assisted Semen Analysis, CASA), así como también se confeccionaron frotis para determinar la vitalidad con la coloración de eosina Y.La exposición a BZ durante 24 h no modificó significativamente la viabilidad de las células TM4 a ninguna de las concentraciones empleadas, por lo que la CC50 se encuentra por encima de 500 µM mientras que para NFX se obtuvo un efecto dependiente de la concentración, siendo la CC50= 335.9 µM (IC95%= 227.2 ? 496.6). Por su parte, ningún parámetro de análisis seminal se vio alterado significativamente con respecto al control (ANOVA de una vía), excepto el porcentaje de Zs móviles progresivos lentos expuestos a 600 µM (p= 0,0374), mientras que el porcentaje de vitalidad de los Zs expuestos a distintas concentraciones de BZ ó NFX no varió significativamente respecto de los valores obtenidos en aquellos sin tratamiento (49,21 ± 6,32 %).Estos resultados indican que tanto NFX como BZ no afectan la viabilidad de células TM4 ni los parámetros de motilidad y viabilidad espermática de semen bovino criopreservado, aun en concentraciones que superan ampliamente la concentración plasmática de los fármacos alcanzada en pacientes.