¿El activador de RhoA, GEF-H1, contribuye al desarrollo tumoral y a la metástasis en el carcinoma mamario?

FERNÁNDEZ CHÁVEZ, L.; BERMÚDEZ, V.; SCHWEITZER, K.; ALONSO, E.G.; FERRONATO, M.J.; FERMENTO, M.E.; ALONSO, E.N.; FACCHINETTI, M.M.; CURINO, A.C.; COLÓ, G.P.

Buenos Aires

Jornada; XXXV Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto Ángel H. Roffo.; 2022

Instituto de Oncología Ángel H. Roffo

Introducción: Las Rho-GTPasas pequeñas, una familia de proteínas G involucradas en diversos procesos biológicos, ciclan de un estado activo unido a GTP a un estado inactivo unido a GDP. Su actividad se encuentra finamente regulada por diferentes activadores (GEFs) o inhibidores (GAPs). Previamente, hemos descripto mediante espectrometría de masas, a GEF-H1 como el principal activador de la GTPasa RhoA. La vía GEF-H1/RhoA interviene principalmente en la formación de adhesiones focales y del citoesqueleto actina, procesos importantes en la proliferación, migración e invasión celular. Además, utilizando distintas bases de datos y bioinformática observamos que la expresión de la proteína GEF-H1 es mayor en cáncer de mama que en otros tipos de tumores.Objetivo: Estudiar la expresión de GEF-H1 en biopsias humanas de carcinoma mamario y su rol en los procesos relacionados al desarrollo tumoral y metástasis.Materiales y Métodos: Se emplearon biopsias humanas y se generaron clones knock-out (GEF-H1-KO), mediante la técnica CRISPR/Cas9, a partir de la línea de carcinoma mamario murino LM3. Estudiamos mediante inmunohistoquímica, inmunofluorescencia, western blot, ensayos de proliferación, formación de colonias, migración e invasión el efecto de anular la expresión de GEF-H1 in vitro. Para el estudio del desarrollo tumoral y metastásico in vivo utilizamos ratones BALB/c inyectados subcutáneamente con la línea GEF-H1 KO y LM3 salvaje.Resultados: En biopsias de pacientes con cáncer de mama, observamos un aumento de la expresión de GEF-H1 en el tejido tumoral respecto al tejido no tumoral (p=0,0208; n=76) y una correlación significativa en pacientes con metástasis. En la línea celular GEF-H1-KO observamos una disminución significativa en la proliferación, formación de colonias, migración e invasión celular (p