Determinación de hidrocarburos policíclicos aromáticos monohidroxilados en orina utilizando un disolvente supramolecular con propiedades de acceso restringido y LC-MS/MS

MARTINEFSKI, MANUELA R.; FEIZI, NEDA; LUNAR, M. LORETO; RUBIO, SOLEDAD

Congreso; 10mo Congreso Argentino de Química Analítica; 2019

La presencia de hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAHs) en el medio ambiente genera gran preocupación en las administraciones sanitarias y medioambientales de todo el mundo debido a sus efectos mutagénicos y carcinogénicos. Estos compuestos pueden encontrarse en el aire, en el suelo, en los alimentos y en ambientes de trabajo, e ingresan al organismo fundamentalmente por inhalación e ingestión. Una vez en organismo, los PAHs se metabolizan a sus correspondientes derivados monohidroxilados (OH-PAHs) y se excretan principalmente en la orina como glucurónidos y sulfatos. Estos derivados monohidroxilados son considerados los principales biomarcadores para evaluar la exposición humana a los PAHs y se encuentran en concentraciones del orden de ng L-1- µg L-1 en la orina.Hasta la fecha, los métodos desarrollados para la determinación cuantitativa de los OH-PAHs en orina requieren tratamientos de muestra complejos, que generalmente incluyen extracciones repetitivas con disolventes orgánicos o SPE, seguidos de una etapa de evaporación. La cuantificación usualmente se lleva a cabo con cromatografía con detección fluorimétrica o acoplada a espectrometría de masas. En este trabajo se propone el uso de un disolvente supramolecular con propiedades de acceso restringido (SUPRAS-RAM), constituido por agregados inversos de ácido decanoico, para la extracción y limpieza de OH-PAHs presentes en muestras de orina humana con la finalidad de simplificar la etapa de tratamiento de muestra y evaluar de forma más directa la exposición humana a los PAHs. El SUPRAS-RAM se generó in situ y de forma espontánea (~ 84 µL) en la muestra de orina previamente hidrolizada (~8.5 mL), mediante la adición de una suspensión coloidal de ácido decanoico (50 mg) en THF (1 mL). La mezcla se completó a 10 mL con agua, se agitó durante 7 min para favorecer la incorporación de los analitos al disolvente supramolecular y se centrifugó para acelerar la separación de fases. Se obtuvieron extracciones cuantitativas (recuperaciones absolutas en el intervalo 91-109%) para diferentes metabolitos de naftaleno, fluoreno, fenantreno y pireno. Polisacáridos y proteínas no se extrajeron en el SUPRAS-RAM lo que permitió el análisis directo de los extractos mediante LC-MS/MS. La sensibilidad del método fue muy elevada; los límites de cuantificación para los diferentes OH-PAHs oscilaron entre 1.0 to 6.7 ng L-1 sin necesidad de una etapa adicional de evaporación de los extractos. La precisión se evaluó en términos de repetibilidad y reproducibilidad y varió entre un 1.1 y un 13.8%. El método se aplicó al análisis de 16 muestras de orina colectadas a partir de voluntarios fumadores y no fumadores. Las características del método propuesto, en términos analíticos y operacionales, lo hacen muy apropiado para evaluar la exposición humana a PAHs.