CUANTIFICACIÓN SIMULTÁNEA DE 8 ESTEROIDES SÉRICOS DE RELEVANCIA EN ENDOCRINOLOGÍA PEDIÁTRICA POR LC-APCI-MS/MS

MARTINEFSKI, MANUELA R.; AMBAO, VERÓNICA; RODRIGUEZ, MARÍA EUGENIA; BALLERINI, MARÍA GABRIELA; REY, RODOLFO; MONGE, MARÍA EUGENIA; ROPELATO, MARÍA GABRIELA

Congreso; I Congreso INFIBIOC; 2023

El análisis de esteroides en diferentes muestras biológicas una herramienta fundamental para pesquisa neonatal, diagnóstico y seguimiento de la patología endocrinológica pediátrica. La mayoría de los métodos utilizados en la clínica son basados en inmunoensayos, cuya especificidad es limitada. En los últimos años, la técnica de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) se ha introducido en el laboratorio clínico especialmente mediante abordajes de metabolómica dirigida, debido a la excelente selectividad y a la capacidad de análisis de múltiples analitos.El objetivo del presente trabajo fue desarrollar y validar un método por LC-MS/MS utilizando una fuente de ionización química a presión atmosférica (APCI) para determinar simultáneamente un panel de 8 esteroides (cortisol, androstenediona, testosterona, progesterona, pregnenolona, 17-hidroxiprogesterona, 17-hidroxipregnenolona y dehidroepiandrosterona) en muestras de suero de infantes menores de 1 año de edad con y sin patología endocrinológica.El método fue validado de acuerdo con las guías provistas por la FDA y la EMA. Además, se analizaron controles de calidad externos (RIQAS) y un material de referencia (NIST SRM 1950). La cuantificación se llevó a cabo utilizando curvas de calibración en suero libre de esteroides incluyendo estándares internos marcados isotópicamente para cada analito. Los LOQ fueron menores a 3 ng/mL. La exactitud, en términos de recuperación, fue de 91-111% y 96-110% intra- e inter-día, respectivamente. La precisión, en términos de RSD, no superó 7,4% y 12,0% intra- e inter-día, respectivamente. La prueba de aplicabilidad se realizó en muestras pediátricas (61 controles y 19 pacientes con sospecha y/o patología endocrinológica confirmada). La metodología desarrollada y validada resultó ser simple, rápida, sensible, selectiva y reproducible. A su vez, se aplicó exitosamente para el análisis de esteroides en muestras pediátricas y constituye una herramienta eficaz para diagnóstico y seguimiento de trastornos de la esteroideogénesis en etapas tempranas de la vida.