ESTUDIO SOBRE EL 3?UTR DEL VIRUS CHIKUNGUNYA

EUGENIA BARDOSSY; DIEGO E. ALVAREZ; CLAUDIA V. FILOMATORI

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El virus Chikungunya (CHIKV) es una alfavirus transmitido por mosquitos que causa en el hombre síndrome febril acompañado por erupción y artralgia, la cual puede persistir durante años. En el último tiempo, la prevalencia de infección aumentó dramáticamente. Luego de 60 años de circulación exclusiva en Asia y África, CHIKV se diseminó por Europa y América produciendo millones de infecciones. La explosiva propagación de CHIKV está asociada a la incorporación de cambios en su genoma de ARN, los cuales le habrían permitido al virus adaptarse a nuevos ambientes e infectar especies alternativas del mosquito vector.Los virus de ARN contienen en las regiones no codificantes de su genoma (5'UTR y 3'UTR) estructuras complejas capaces de modular la replicación viral dentro de la célula hospedadora. El 3'UTR de CHIKV es una región muy heterogénea debido a la presencia de un número variable de repeticiones cortas de secuencia (DRs por direct repeats) dependientes del linaje viral. Su naturaleza dinámica sugiere que hay presiones de selección opuestas, posiblemente relacionadas con la obligatoriedad del virus de alternar entre dos hospedadores muy diferentes: mamíferos y mosquitos. En el laboratorio nos proponemos estudiar el papel del 3?UTR de CHIKV en la replicación viral. Para ello, disponemos de los clones infecciosos de dos aislamientos de CHIKV: (i) el de la Isla La Reunión y (ii) el de las Islas del Caribe, responsables de los brotes recientes en Europa y América, respectivamente. Por medio de una transcripción in vitro sintetizamos moléculas de ARN del genoma viral, que luego transfectamos en células de mamífero o mosquito crecidas en cultivo. Evaluamos la infectividad viral a distintos tiempos post-transfección mediante curvas de crecimiento e inmunofluorescencia indirecta. Con esta metodología, observamos que el CHIKV-del Caribe posee una mayor capacidad replicativa que el CHIKV-La Reunión en células de mosquito. Por el contrario, la replicación de los dos linajes es comparable en células de mamífero. Entre otras diferencias, ambos aislamientos difieren en su 3?UTR. El CHIKV-del Caribe contiene un 3?UTR largo con mayor número de repeticiones, mientras que el CHIKV-La Reunión contiene un 3?UTR mucho más compacto. Mediante técnicas de genética inversa construimos virus quiméricos que contienen el 3? de CHIKV-La Reunión en el contexto de CHIKV-del Caribe, y viceversa. Por otra parte, delecionamos copias de las DRs en los clones infecciosos y evaluamos su infectividad. Los virus recombinantes con menor número de DRs tuvieron una desventaja replicativa en células de mosquito pero no en células de mamífero, indicando que las DRs tienen significancia funcioional en mosquito. En su conjunto, nuestros resultados demuestran que existen requerimientos diferenciales en el 3?UTR de CHIKV para la replicación viral en ambos hospedadores. Nuevos estudios en esta dirección nos ayudarán a entender la evolución de CHIKV y su potencial adaptación a nuevos ambientes.