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El virus de dengue (DENV) es un flavivirus (familia Flaviviridae) transmitido al hombre por la picadura del mosquito vector Aedes aegypti. Se estima que en el mundo ocurren entre 50 y 100 millones de infecciones al año y en Argentina se registró en 2016 la mayor epidemia de dengue con alrededor de 40 mil casos confirmados. Durante la fase aguda, la enfermedad se presenta como un síndrome febril indiferenciado que puede progresar a cuadros de fiebre hemorrágica. El diagnóstico de laboratorio es esencial para el manejo terapéutico de los pacientes y para el desarrollo de sistemas de vigilancia epidemiológica. La detección de anticuerpos contra la proteína de envoltura del virus es el método de elección para el diagnóstico hacia el final de la fase aguda. Si bien el ELISA de captura de anticuerpos M (MAC-ELISA) brinda alta sensibilidad, no se cuenta aún con pruebas serológicas rápidas que tengan un desempeño similar al MAC-ELISA. Además, la mayoría de los ensayos comerciales se basa en la utilización de virus enteros como antígenos para el diagnóstico serológico. Nuestro objetivo es desarrollar nuevos reactivos y sistemas diagnósticos para la detección de dengue. Utilizando la tecnología del ADN recombinante se expresó el dominio III de la proteína de envoltura del virus de dengue como fusión a GST (GST-ED3) en E. coli y se evaluó su desempeño como antígeno para el diagnóstico serológico de dengue. Con este fin se desarrolló un ELISA indirecto basado en la inmovilización de GST-ED3 y la detección de anticuerpos IgM en muestras de plasma con un anticuerpo secundario contra IgM humana. Este ensayo demostró una sensibilidad del 85% y una especificidad del 93% con respecto al MAC-ELISA. Para los casos en los que se observó discordancia entre las dos técnicas, se realizó el diagnóstico confirmatorio empleando el ensayo de neutralización por reducción de placas (PRNT). En líneas generales, los resultados de este ensayo convalidaron la diferencia en sensibilidad entre las dos técnicas aunque también se identificaron resultados falsos negativos en el MAC ELISA que se detectaron como positivos en el ELISA indirecto que emplea GST-ED3 como antígeno. Para evaluar la especificidad del ELISA indirecto, se ensayó la reacción cruzada de GST-ED3 frente a muestras de pacientes con serología positiva para los virus de zika (familia Flaviviridae), fiebre amarilla (familia Flaviviridae) y chikungunya (familia Togaviridae). En ninguno de los casos se obtuvo reactividad frente a GST-ED3, indicando que este dominio de la poteína de envoltura contiene espitopes específicos para DENV. En su conjunto, nuestros resultados indican que GST-ED3 puede ser empleado como reactivo para el diagnóstico serológico de dengue. Finalmente, se plantea como perspectiva adaptar el formato de ELISA indirecto a sistemas de detección rápida, portátiles y de bajo costo (diagnósticos Point-of-Care) como inmunobiosensores o ensayos inmunocromatográficos.

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