ESTUDIO DE LA PROPAGACIÓN CÉLULA A CÉLULA DEL VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA

FERNANDO MERWAISS; MARÍA JOSE PASCUAL; DIEGO ALVAREZ

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es un pestivirus patógeno del ganado vacuno cercanamente relacionado al virus de la hepatitis C (HCV) dentro de la familia Flaviviridae de virus de RNA simple cadena de polaridad positiva. La cubierta del virus está compuesta por una membrana lipídica y las glicoproteínas estructurales E1 y E2 que median la entrada del virus a la célula huésped. Esta última es inmunodominante en el animal infectado y produce una respuesta inmune con anticuerpos neutralizantes contra BVDV. Nuestro objetivo es comprender cuáles son las interacciones huésped-patógeno que median la entrada de BVDV a la célula huésped. Se ha reportado que para diversos virus, entre los que se incluye HCV, la propagación de la infección viral depende de dos vías distintas: la difusión de partículas virales libres a través del espacio extracelular y la propagación directa entre dos células vecinas por contactos intercelulares. Mientras que la primera de estas vías permite la propagación a través de grandes distancias dentro de un individuo infectado, e incluso entre individuos distintos, la segunda vía de propagación puede evitar barreras epiteliales y respuestas inmunes mediadas por anticuerpos, que usualmente limitan la transmisión de virus libres, contribuyendo de manera importante a la patogénesis de la infección viral. Por lo tanto, el diseño de estrategias antivirales para impedir la diseminación viral en un individuo infectado requiere una comprensión profunda de los mecanismos moleculares que permiten la propagación de la infección. Utilizando genética inversa para manipular el genoma del virus desarrollamos nuevas herramientas que nos permitirán estudiar el detalle molecular del proceso de entrada y propagación viral. Se construyó un virus recombinante que expresa una versión de E2 en fase con la proteína fluorescente mCherry en su extremo amino terminal, lo cual permite la generación de partículas virales fluorescentes. Utilizando estos virus, pueden identificarse las células infectadas mediante la detección de mCherry y seguir la infección en células vivas. Para poder determinar si la propagación de la infección en un cultivo celular tiene un componente intercelular, se expresó y purificó una versión recombinante de la proteína de envoltura E2 utilizando el sistema de Baculovirus y se la utilizó para inmunizar ratones y producir un suero específico contra dicha proteína. Este suero resulto ser completamente neutralizante de la capacidad infectiva de las partículas libres de BVDV en cultivos celulares in vitro. Sin embargo, en ensayos de co-cultivo de células previamente infectadas y células blanco no infectadas, se detectó propagación de la infección viral desde células productoras de virus hacia células blanco, aun en presencia de suero neutralizante en el medio. De esta forma hemos reportado por primera vez la propagación célula a célula de pestivirus.