DISEÑO DE UNA VERSIÓN RECOMBINANTE DE LA GLICOPROTEÍNA DE ENVOLTURA E2 UNIDA A BIOTINA COMO VACUNA MARCADORA CONTRA EL VIRUS DE LA DIARREA VIRAL BOVINA

FERNANDO MERWAISS; MYRIAN TROTTA; DIEGO E. ALVAREZ; ALEJANDRA V. CAPOZZO

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es un patógeno del ganado vacuno que pertenece al género pestivirus de la familia Flaviviridae de virus de RNA de simple cadena. La infección por BVDV es altamente prevalente en la Argentina provocando pérdidas económicas para la industria lechera y ganadera. Actualmente se administran en campo vacunas a virus inactivado con resultados dispares en el control de la infección por BVDV. La glicoproteína de envoltura E2 de BVDV es inmunodominante en el animal infectado y produce una respuesta inmune con anticuerpos neutralizantes contra BVDV. Por este motivo E2 es el antígeno ideal para el desarrollo de vacunas a subunidad. Con el objetivo de generar una nueva versión recombinante de E2 que sirva como vacuna marcadora permitiendo diferenciar animales infectados de vacunados, se desarrolló un sistema de expresión eucariota para producir una versión soluble de E2 acoplada a biotina (E2-biotina). La unión sitio-específica de biotina se acopló a la síntesis de E2 a través de la co-expresión en células eucariotas de la proteína E2 fusionada en su extremo N-terminal a un péptido aceptor de biotina (BAP) de 15 aminoácidos y de la proteína ligasa de biotina BirA de Escherichia coli, que reconoce específicamente a BAP para unir covalentemente una molécula de biotina a un residuo lisina del péptido. E2-biotina se purificó del sobrenadante de células en cultivo mediante cromatografía de afinidad. Utilizando ensayos de inhibición del efecto citopático en células en cultivo, demostramos que E2-biotina inhibe eficientemente la infección por BVDV sugiriendo que la proteína recombinante es funcional. Con el fin de evaluar la inmunogenicidad de E2-biotina se realizó una prueba de vacunación en bovinos. Los animales fueron inmunizados en dos dosis con E2-biotina o con la proteína recombinante sin biotina. Se presentarán los resultados de ensayos de seroneutralización y el diseño de una prueba adecuada para diferenciar animales vacunados de animales infectados basada en la detección de BAP-biotina.