Análisis de la variabilidad genómica de Iridovirus de mosquitos (MVI: Mosquito Virus Iridiscente), aislados de poblaciones naturales, mediante la utilización de una biblioteca genómica.

GUEVARA SOLEDAD; MUTTIS EVANGELINA; FERRARI WALTER; MICIELI MARIA VICTORIA; PABLO D. GHIRINGHELLI

Jornada; XI Jornadas Regionales sobre mosquitos; 2018

Universidad Nacional de La Rioja

La familia Iridoviridae comprendevirus patógenos de vertebrados y de invertebrados, principalmente insectos perotambién crustáceos y moluscos de hábitat acuático o húmedo. Los Iridovirus secaracterizan por su forma icosaédrica y un tamaño aproximado de entre 120 y 300nm. Otra particularidad de este virus es el efecto óptico que se produce cuandolas partículas se encuentran apiladas masivamente a modo de arregloparacristalino reflejando color iridiscente (King et al., 2012). Los colores pueden variar desde el violeta alturquesa como también desde el verde al naranja (Williams, 2008). Estudiospreliminares indican heterogeneidad genética. Poblaciones que comparten lugar ytiempo pueden albergar variantes genéticamente distintas. La cuantificación dela variación intraespecífica en el genoma viral mejoraría nuestra capacidadpara definir las especies y representaría un primer paso hacia la comprensiónde la relación entre el genotipo y el fenotipo de la infección de estos virus.En el presente trabajo realizamos un estudio de la variación en segmentos delgenoma viral de distintos aislamientos virales que presentaron diferentescondiciones, como ser: fenotipo,  especiede mosquito, sitio de cría del vector y fecha de colecta. Para ello se llevó acabo la amplificación de secuencias a partir de cinco pares de oligonucleótidosespecíficos diseñados a partir de la secuencia de algunos clonescorrespondientes a una biblioteca genómica obtenida mediante la digestión deuna cepa de referencia (aislamiento de La Granja, La Plata) con la endonucleasaHindIII. La extracción de ADN se realizó con el Kit de Purificación de ADN(WizardGenomic DNA, Promega). Las muestras analizadas correspondieron a 28 larvasde Culex pipiens infectadas con elvirus recolectadas en zanjas de distintas localidades del partido de La Plata yBerisso y en distintos momentos del año y a dos larvas de Aedes albifasciatus. Los estados inmaduros colectados se revisaronpara sintomatología de infección con Iridovirus con microscopio estereoscópicobajo fondo oscuro. La identificación de las larvas de 4to estadio serealizó utilizando claves dicotómicas. Los ejemplares que mostraroniridiscencia fueron conservados a -70ºC hasta su procesamiento. Se utilizaron 3ejemplares para cada condición evaluada. Se construyó una matriz de presencia /ausencia de las bandas correspondientes a los amplicones generados con los cincopares de primers para cada muestra procesada y se construyó un dendrograma queagrupa los patrones por grado de similitud. Los resultados muestran que los ampliconescorrespondientes a los juegos de primers IC28 e IC35 se encuentran mucho másconservados que los otros, los cuales muestran alta variabilidad. Lavariabilidad observada no pudo ser asociada con ninguno de los factoresestudiados. En base a estos resultados se aprecia una heterogeneidad en losaislamientos que, potencialmente se puede interpretar como la detección de unacepa altamente variable.