Utilización de una cepa atenuada de Salmonella como sistema de expresión de antígenos de HVB-1

IGNACIO CEBRIAN; VICTORIA GNAZZO; SEBASTIÁN PAPPALARDO; CECILIA LANGELLOTTI; VALERIA QUATTROCCHI; OSCAR TABOGA; JOSÉ CHABALGOITY; ANA SADIR; PATRICIA ZAMORANO

Congreso; XXVI Reunión Anual de la SAV; 2006

Sociedad Argentina de Virología

El Herpes Virus Bovino tipo 1 (HVB-1) es un patógeno que afecta al ganado causando gran variedad de sintomatologías y por lo tanto importantes pérdidas. Una vez que el virus entra al organismo puede establecer latencia con células ganglionares y de esta forma el animal infectado lleva al virus de por vida. En países con alta prevalencia como Argentina, la vacunación es la principal estrategia. En un intento de elaborar una vacuna eficiente contra HVB-1 hemos desarrollado un sistema vivo de liberación de antígenos utilizando una cepa atenuada de Salmonella. Estas bacterias atenuadas replican durante varios días y luego son eliminadas. Mientras persisten estimulan la respuesta inmune humoral y celular tanto contra los antígenos de Salmonella como contra las proteínas heterólogas que expresan. Además los antígenos son expresados y presentados directamente en las células presentadoras de antígenos (APC), tales como macrófagos y células dendríticas. En nuestro caso, Salmonella typhimurium LVR03, lleva consigo el plásmido pTECH2 capáz de expresar al péptido inmunogénico repetido varias veces en tandem. Hemos clonado una región inmunogénica de la proteína gD de HVB-1 una, dos y cuatro veces. Fusionado a este antígeno foráneo se encuentra el fragmento C de la toxina tetánica (TetC) que tendría la función de adyuvante. Así, el vector expresa una gran proteína de fusión con propiedades adyuvantes e inmunogénicas. La clonación múltiple fue confirmada a través de la utilización de enzimas de restricción y de la secuenciación automática. Utilizando técnicas de Biología Celular (Western Blot e Inmunofluorescencia) se corroboró el correcto funcionamiento del sistema de expresión utilizado. Las distintas variantes de la vacuna fueron probadas en dos grupos experimentales diferentes con ratones BALB/c. Los sueros y salivas de estos ratones fueron analizados mediante la técnica de ELISA y se midió el nivel de anticuerpos (Acs) IgG totales y de IgA. Los ratones del primer grupo, finalizado el período de inoculación y booster, fueron expuestos al virus HVB-1 inactivado (administración intraperitoneal) y se extrajo suero a los 5 días post-inoculación con el virus para investigar la respuesta inmune de memoria. Los ratones del segundo grupo, en cambio, serán vacunados (luego de los períodos de inoculación y booster) con una vacuna génica que expresa la proteína gD completa de HVB-1, y se extraerán los sueros y salivas a los 7 días aproximadamente.