Estudio de sensibilidad de levaduras lipodependientes mediante el Método de Microdilución en caldo

ROJAS F; GIUSIANO G

Jornada; Reunión de Comunicaciones Cintíficas y Teconlógicas 2010. Universidad Nacional del Nordeste; 2010

Universidad Nacional del Nordeste

Se introdujeron modificaciones a la técnica de referencia de la CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) para su aplicación al estudio de la sensibilidad de levaduras lipodependientes y determinar la actividad in vitro de drogas azólicas de uso habitual frente a levaduras del genero Malassezia Se estudiaron cepas de Malassezia spp. previamente genotipificadas por PCR-RFLP. Los especimenes se repicaron en Agar Dixon modificado y se incubaron a 32ºC hasta 5 días. Se introdujeron variantes a la metodología del micrométodo M27 A3 estandarizado por el CLSI. Al medio base se le adicionaron suplementos para asegurar el crecimiento de estas levaduras. Se determinó la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) para ketoconazol y fluconazol. Las placas se incubaron a 32°C y las lecturas se realizaron durante 10 días. Cepas de referencia: Candida krusei ATCC 6528 y Candida parapsilosis ATCC 22019. Se estudiaron 55 cepas: 24 Malassezia furfur, 19 M. sympodialis, 12 M. globosas. El medio base suplementado permitió un buen desarrollo de Malassezia. Los valores de CIM para M. furfur y M. sympodialis pudieron ser leídos a partir de las 72 horas de incubación, mientras que para M. globosa no pueden ser determinados sino a partir del día 5. El 91% de las cepas presentó valores de CIM para ketoconazol menores a 0.06 µg/ml y el 9% restante no presentó CIM mayores a 0.5 µg/ml. M. furfur presentó rangos de CIM que oscilaron entre 16-0.25 µg/ml, pero el 80% de las cepas mostraron valores entre 4 µg/ml y 1 µg/ml. M. sympodialis presentó rangos entre 4 y 0.125 µg/ml, con un 68% de las cepas con valores de 1 a 0.25µg/ml. M. globosa presentó valores entre 4 y 0,06 µg/ml con el 75 % de las cepas con valores de 1 a 0.25 µg/ml. Las modificaciones introducidas al método de referencia permitieron una buena lectura de la CIM. Si bien el tiempo de incubación requerido para obtener un crecimiento óptimo dependió de las especies, esto no se debe al medio modificado, sino a la diferente velocidad de crecimiento que presenta cada especie. Los resultados muestran una buena actividad inhibitoria del ketoconazol frente a las especies más frecuentes. Por el contrario, la actividad del fluconazol fue variable según la especie. M.furfur fue la especie que mostro valores de CIM mas altos para este antifúngico coincidente con los demostrado en estudios previos.