Análisis estructural de esporas de Carbón del maní

DIAZ M.S.; FIGUEROA A.C. ; ALASINO R.V. ; QUEVEDO V. ; NOME C. ; BELTRAMO D.M

Congreso; 7° Congreso Argentino de Microscopía SAMIC 2022; 2022

Introducción.El carbón del maní es una enfermedad endémica, causada por el hongo Thecaphorafrezii, que produce importantes pérdidas económicas en el cultivo. Sus teliosporassobreviven en el suelo, resultando infectivas entre campañas consecutivas. Hasta elmomento no existe una caracterización estructural profunda de las mismas, lo cualresulta de sumo interés a la hora de visualizar estrategias de control.Materiales y métodos. Las teliosporas de T.frezii se obtuvieron de frutos enfermos (hipertróficos), los cuales fueron desinfectados superficialmente.Se analizó un pool de enteras y con ruptura mecánica.Se realizó: Microscopía de campo claro (CC). Microscopía de fluorescencia (MF): Tinción con calcofluor (identif. de uniones glucosidicas). Microscopía electrónica de barrido (SEM):Muestras disecadas en punto crítico y metalizadas con oro. Microscopia electrónica de transmisión (TEM):Muestras fijadas e incluidas en resina Spurr Low Viscocity. Cortes ultrafinos de 90 nm,contrastados con citrato de plomo pH 12 y acetato de uranilo 2%.Resultados. Se observa que las teliosporas de Carbón del maní se acumulan en glomérulos de 2 a 5 esporas,con un tamaño promedio de 50um de diámetro. Las esporas presentan una pared conornamentaciones y se observan pigmentadas de color marrón.Cuando se rompieron por ruptura mecánica ejerciendo presión entre dos vidrios, se observa laliberación de una endospora. La pared de esta endospora, a diferencia de la capa externa, presentauna superficie lisa.La tinción con blanco de calcofluor, que es un colorante que se une a enlaces glucosídicos, fuenegativa para las esporas enteras, sin embargo se observó fluorescencia azul cuando la pared de la endospora quedó expuesta por la rotura de la pared externa de la espora.En la microscopía SEM se observa la ornamentación externa de las esporas, formada por varias capas de diferente grosor; la capa más externa conformada de superficie rugosa densa de aprox. 1um de espesor en las crestas y 0.5 um en los valles. Por debajo se encuentra una capa de fibras de distribución homogénea de aprox. 0.3 um de espesor. En el interior se evidenció una endospora cuya pared se compone de fibras dispuestas longitudinalmente con un patrón muy similar a la quitina comercial.En la microscopía TEM se encontraron muchos glomérulos vacíos, atribuible al desprendimiento del material en el corte. En algunos pudo identificarse el citoplasma de color gris claro, aunque no se precisó en estos cortes presencia de núcleo discreto, mitocondrias ni RE. En algunas teliosporas se detectaron ribosomas agrupados en zonas periféricas o el citoplasma lleno de vacuolas, compatibles con cuerpos lipídicos.Conclusiones. En las estructuras de resistencia de T. frezii pudo observarse una conformaciónexterior ornamentada y una estructura interior compuesta por una pared glucosídica. Se vieron glomerulos vacíos aunque algunos presentaron citoplasma electrodenso.Este trabajo representa la primera descripción de las estructuras de resistencia del hongo T. frezii y su conocimiento resulta un importante aporte para diseñar estrategias de manejo del mismo