Desarrollo y caracterización de nanopartículas asociadas a anticuerpos como estrategia innovadora para la detección y neutralización de la toxina Shiga tipo 2

FLAVIA SACERDOTI; MARCELA MORETTON; FERNANDO GOMEZ; CALUDIO DANIEL GIRON REYES; MARIA MARTA AMARAL; DIEGO CHIAPPETTA; CRISTINA IBARRA

Asunción

Congreso; Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2021

Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM)

Intro: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno de transmisiónalimentaria responsable de desencadenar el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). El principalfactor de virulencia de STEC responsable del desarrollo del SUH, es la toxina Shiga (Stx). Lavariante tipo 2 de Stx (Stx2) es la que se asocia a los cuadros clínicos más graves de estaenfermedad.Objetivos: En el presente trabajo proponemos desarrollar y caracterizar nanopartículasacopladas a anticuerpos con alta capacidad neutralizante de Stx2 con el objetivo de introducirpropuestas innovadoras para la detección de Stx y el tratamiento de SUH.MyM: Se formularon nanopartículas (NP) de Soluplus® al 5 y 1% (NP) en PBS y se acoplarondiferentes concentraciones (2, 4 y 6 mg/ml) de Ac bovino anti Stx2 de calostro bovinohiperinmune (NP-IgG-Stx2) o control (NP-IgG-Ctrl), previamente purificados por cromatografíade afinidad. Se evaluó por la técnica de DLS (Dispersión de Luz Dinámica) el radiohidrodinámico de las NP de Soluplus® y las IgG solas y luego de su asociación. Se evaluó latoxicidad de las NP sobre células Vero con revelado por incorporación de rojo neutro. Una vezrealizado el acople de las NP con las IgG se realizaron ensayos de neutralización de Stx2 in vitrosobre células Vero con diferentes concentraciones de la NP-IgG-Stx2 o NP-IgG-Ctrl y finalmentese determinó el % de viabilidad celular para cada tratamiento.Resultados: El análisis del radio hidrodinámico de las NP de Soluplus® mostró un diámetropromedio de las 70,2 ± 1,5 nm. Las IgG-Stx2 purificadas arrojaron un diámetro promedio a laconcentración máxima utilizada de 40,9 ± 2 nm. Cuando ambos componentes se asocian (NPIgG-Stx2 o NP-IgG-Ctrl) el diámetro que se conserva es el de la nanopartícula (70,4 ± 0,2 nm).Las NP-IgG-Stx2 neutralizaron una CD50 de Stx2 sobre células Vero hasta con unaconcentración de 1 µg/ml de anticuerpo. Cuando se comparó la capacidad neutralizante deStx2 por parte de IgG-Stx2 vs NP-IgG-Stx2 se observaron diferencias en la capacidadneutralizante con una mejora significativa en la viabilidad observada con el tratamientorealizado con NP-IgG-Stx2 respecto a de las IgG-Stx2 (p