Evaluación de la proteasa que cliva al factor von Willebrand (vWF) independientemente del vWF

KEMPFER ANA C; AMARAL MARÍA M; FARÍAS, CRISTINA; SILAF MARÍA R; CARBALLO GONZALO A; LAZZARI MARÍA A

Mar del Plata

Congreso; SAIC Sociedad Argentina de Investigación Clínica XLV Reunión Científica SAI Sociedad Argentina de Inmunología XLVIII Reunión Científica; 2000

SAIC-SAI

El método publicado (A) para cuantificar la proteasa que cliva al VWF consiste en: a) dilución de la muestra incógnita 1/20 y las muestras de referencia desde 1/20 a 1/640 b) activación de la proteasa 5 min 37°C en presencia de bario c) agregado de 1 U/mL de VWF purificado d) siembra de las muestras sobre filtros de nitrocelulosa suspendidos en una solución de urea (despliegue del VWF) e) incubación 24h a 37°C y f) análisis multimérico para evaluar el efecto de la proteasa sobre el VWF purificado. En nuestros experimentos, utilizando el método A, no observamos actividad proteásica en 6 plasmas normales desde la dilución 1/40. Como a diluciones menores de 1/20 se detectan además las posibles anomalías del VWF de la muestra, se ultrasonicaron (20Kc y 60W, durante 20 min) los plasmas para degradar los multímeros grandes e intermedios del VWF, consrvando sólo la actividad proteásica. Se utilizó el método A y el método B (por perfusión), para desplegar el VWF para determinar la actividad proteásica en un paciente con púrpura trombocitopénica trombótica. Se concluye que para cuantificar la proteasa independientemente del VWF se requiere la ultrasonicación del plasama. El patrón multimérico del VWF purificado con la dilución 1/5 del paciente coincide con el de la dilución 1/20 de las curvas de referencia (métodos A yB), por lo que la actividad proteásica del paciente es de 25% (n=4).