Purificación de la proteasa que cliva al factor von Willebrand (adamts-13)

KEMPFER, ANA C; AMARAL MARÍA M; VERA, EZEQUIEL; FARÍAS CRISTINA; LAZZARI MARÍA A

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC, SAI, SAFE, SAB, SAB, SAN, SAF.

Desarrollamos la purificación parcial de ADAMTS-13 por métodos de buen rendimiento para proteínas. Se ensayaron los esquemas de preparación de crioprecipitados (1) y preparación de concentrados con polietilenglicol al 4% (2), tratamiento con glicina (3), y con NaCl (4) según técnica de Thorell. Además, se combinaron en serie el sobrenadante obtenido del método 1 con la precipitación del método 2 (5) y el precipitado dializado del método 2, con el método 1 (6). Se determinó la actividad de la ADAMTS-13 sobre VWF purificado humano con detección por unión del VWF al colágeno, el VWF: Ag por ELISA, fibrinógeno por inmunoelectroforesis y proteínas por el método de Bradford. La actividad específica (AE) de cada parámetro se expresó en unidades por g de proteína (U/g). La purificación se expresó como cociente entre la AE de las muestras (U/g) y la del plasma original (14 U/g). Los resultados (media±SD) de purificación de los precipitados (a) y sobrenadantes (b) obtenidos (n=3), se muestran en la Tabla ADAMTS-13 en a enLos métodos que evidenciaron mayor AE de ADAMTS-13 respecto al plasma original son: 2a, 3b, 6a y 6b. El método que generó ADAMTS-13 menos contaminada es el 6b, lo que indica que la combinación de los métodos es adecuada para la obtención de ADAMTS-13 con fines de investigación y para su posible uso terapeútico.