Estudio del rol de las enzimas modificadoras de la cromatina Myst2 y Prmt8 en células madre embrionarias

LUZZANI, CARLOS; WAISMAN, ARIEL; SOLARI, CLAUDIA; LOSINO, NOELIA; BARAÑAO, LINO; MIRIUKA, SANTIAGO; GUBERMAN, ALEJANDRA

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Las Células Madre Embrionarias (CME) poseen la capacidad de proliferar indefinidamente in vitro y pueden ser diferenciadas a múltiples tipos celulares de interés. Durante la diferenciación ocurren cambios en la organización de la cromatina a nivel global y de loci específicos. Nuestra hipótesis es que ciertos factores de transcripción específicos de CME, como Oct3/4, SOX2 y Nanog, regulan la expresión de genes que codifican para enzimas modificadoras de la cromatina y que éstas, a su vez, podrían modular la expresión de los primeros. Anteriormente, estudiamos la regulación transcripcional de ciertas enzimas durante la diferenciación de células madre pluripotentes. En este trabajo, estudiamos la relevancia de dos de ellas, Myst2 y Prmt8, sobre el mantenimiento de la pluripotencia y la diferenciación de CME. , En primer lugar, realizamos un estudio in silico de sus promotores en búsqueda de posibles sitios de unión de Oct3/4, SOX2 y Nanog y diseñamos primers que nos permitirán confirmar, mediante el ensayo de imunoprecipitación de la cromatina, su interacción con los factores de transcripción de CME. Luego, diseñamos una serie de shRNAs (short hairpin RNAs) específicos para cada uno de estos genes con el objetivo de silenciarlos y los clonamos en un vector lentiviral que posee los elementos necesarios para su correcta expresión. Establecimos líneas de CME que expresan establemente estos shRNAs y determinamos por RT-qPCR la disminución de los niveles de mRNA correspondientes. Nos encontramos analizando los marcadores de pluripotencia de estas líneas celulares y estudiando el rol que estas enzimas pueden tener en los procesos de diferenciación, analizando la morfología, el tamaño, la frecuencia de formación y la expresión de marcadores en los cuerpos embrioides derivados de las mismas.