La Fibronectina que incluye el exón ED-I aumenta la proliferación de células madre embrionarias

LOSINO, NOELIA; SOLARI, CLAUDIA MARÍA; LUZZANI, CARLOS; WAISMAN, ARIEL; MURO, ANDRÉS; BARAÑAO, LINO; GUBERMAN, ALEJANDRA

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Las células madre embrionarias de ratón (mCME) pueden ser propagadas en el medio condicionado (MC) por la línea celular de granulosa bovina BGC, preservando sus propiedades básicas y aumentando su proliferación. La propiedad mitogénica de este medio fue reportada sobre células de granulosa, adjudicándole dicho efecto a la isoforma de fibronectina (FN) que incluye el exón ED-I (FN+ED-I). Nuestra hipótesis es que la FN+ED-I secretada por las BGC sería responsable del aumento en la proliferación de las CME. Nuestro objetivo es determinar si la FN+ED-I aumenta la proliferación en CME. Estudiamos este proceso mediante el ensayo de MTT y analizamos el tamaño de las colonias. Evaluamos el efecto de medios condicionados por distintas líneas de fibroblastos embrionarios murinos (MEF). Las CME propagadas en MC de MEF +/+, que secretan solo FN+ED-I, proliferaron más que en MC MEF wt, que secreta ambas formas y éstas más que en MC de MEF -/-, que secretan solo FN que excluye ED-I. También evaluamos el efecto de un péptido de FN que incluye o no el exón ED-I, agregado al medio de proliferación (MP). El péptido FN+ED-I aumentó la tasa de proliferación de manera dosis dependiente. Al analizar si el MC de BGC afecta la inclusión de ED-I por las CME, para estudiar si hay un efecto sobre la FN endógena, comparamos la expresión de estas dos formas en CME cultivadas en MC y MP. Por RT-PCR detectamos que las CME al igual que la línea BGC, expresan ambas isoformas. Sin embargo, el MC no afectó la inclusión de ED-I por las CME. En síntesis, demostramos que la FN-EDI aumenta la proliferación en CME. Planificamos silenciar la expresión de FN+ED-I en las BGC para determinar su contribución en este efecto. Resultados preliminares indican que el MC de BGC no afecta la proliferación de células madre pluripotentes inducidas, evidenciando un mecanismo diferente. La comprensión de estos procesos puede contribuir a la futura aplicación terapéutica de las células madre.