INVESTIGADORES
FERNANDEZ Paula Virginia
congresos y reuniones científicas
Título:
Importante inhibición directa de trombina, mediada por un arabinano de algas verdes
Autor/es:
FERNÁNDEZ, PAULA VIRGINIA; CIANCIA, MARINA; ESTEVEZ, JOSÉ MANUEL; POL-FACHIN, LAERCIO; VERLI, HUGO; CARAMELO, JULIO; QUINTANA, IRENE L.
Lugar:
Montevideo
Reunión:
Congreso; XXII Congreso Internacional del Grupo Cooperativo Latinoamericano de Hemostasia y Trombosis; 2011
Resumen:
Investigaciones previas en polisacáridos de
Codium vermilara nos permitieron identificar
a un arabinano (Ab) persulfatado, con
importante acción inhibitoria directa sobre la trombina (T). El objetivo de
este trabajo fue profundizar los conocimientos sobre este mecanismo de acción
anticoagulante. METODOLOGÍA: Se
determinaron el Tiempo de Tromboplastina Parcial Activada (APTT) y el Tiempo de Trombina (TT)
en plasma humano citratado incubado con soluciones de arabinanos (5µg/ml), con
diferentes grados de sulfatación (Ab1>Ab2>Ab3). Se realizaron ensayos
amidolíticos, en ausencia de inhibidores fisiológicos, con trombina humana (TH)
y bovina (TB). La interacción entre T y Ab se evaluó por simulación dinámica
molecular (SDM), dicroísmo circular (DC) y espectroscopía de fluorescencia (EF). RESULTADOS Y DISCUSIÓN: Ab1 es el arabinano más activo (APTTensayo/APTTcontrol=
2,6; TTensayo/TTcontrol >10). Teniendo
en cuenta que Ab2 tiene menor grado de sulfatación y que está sulfatado principalmente
en C-4, la menor actividad de este polisacárido muestra la importancia de la
cantidad de grupos sulfato y posición de los mismos en el esqueleto
hidrocarbonado. Además, la acción inhibitoria de Ab1 resultó mayor sobre TB que
sobre TH. SDM: Cuando Ab1 se une al
exositio 2 de la trombina induce importante cambio conformacional en el sitio
catalítico de la enzima. El grupo sulfato en C-2 parece interactuar más fuertemente
con T, lo que confirma los resultados experimentales. La energía de interacción
entre TB-Ab1 es significativamente mayor (-1017±103 kJ/mol) que entre TH-Ab1 (-756±95 kJ/mol). DC (en el UV lejano): Ab1 induce un
cambio conformacional en la trombina. EF:
Existe una unión cooperativa entre T y Ab1, con Kd = 5,5mM. CONCLUSIÓN: Ab1 mostró importante
inhibición directa de T. Este efecto depende del grado de sulfatación del
polisacárido y la posición de sustitución de los grupos sulfato. Ab1 induce
mayor alteración en la tríada catalítica de la TB que en la de TH, explicando la diferencia en
su efecto anticoagulante. Ab1 modula la actividad de T a través de la
interacción con el exositio 2 de la enzima.