Desarrollo y caracterización de vectores vacunales que expresan la proteína Nef del intersubtipo BF del HIV-1

ANA MARÍA RODRIGUEZ; G.TURK; F.FERRER; F.ZANETTI; JL.NÁJERA; D.MÓNACO; G.SCHULMAN; MF.PASCUTTI; G.CALAMANTE; M.ESTEBAN; H.SALOMÓN; MM.GHERARDI

Paraná

Congreso; Congreso Nacional de SIDA; 2007

El objetivo de este trabajo fue el desarrollo y caracterización de vectores génicos y virales que se emplearán para analizar la inmunidad celular subtipo específica frente a  antígenos del intersubtipo BF del HIV-1. El gen NefBF fue amplificado por PCR a partir del genoma viral de la forma circulante CRF_12BF y clonado en un vector de ADN. La expresión de la  proteína se analizó en células humanas y murinas mediante Western Blot. Por otro lado, el vector recombinante basado en la cepa atenuada del virus vaccinia (MVA) se generó mediante la infección-transfección con un vector de transferencia. En éste se subclonó el gen NefBF bajo el promotor sintético de vaccinia e/l, flanqueado por regiones genómicas virales promotoras de la recombinación. El MVANefBF se purificó tras 8 ciclos de infección y selección. Posteriormente, el vector se caracterizó mediante el análisis de pureza por PCR diferencial, se evaluó la estabilidad del gen recombinante tras 10 pases y se realizaron cinéticas de replicación y expresión en líneas celulares permisivas y no permisivas para MVA. CONCLUSIÓN: En este trabajo se muestra la obtención y caracterización de vectores génicos y virales (basados en MVA) que se utilizarán en ensayos in vivo en ratones. Éste es un avance en el desarrollo de inmunógenos usando antígenos del intersubtipo BF de HIV.