INVESTIGADORES
RODRIGUEZ Ana Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
Generacion y caracterizacion de un vector viral que expresa la proteina gp160 de la forma recombinante circulante del HIV, CRF12_BF
Autor/es:
MONACO,D; CAROBENE,M; ANA MARÍA RODRIGUEZ; NAJERA, JL; SCHULMAN,G; PASCUTTI,MF; SALOMON,H; ESTEBAN, M; GHERARDI,MM
Lugar:
Parana
Reunión:
Congreso; Congreso Nacional de SIDA; 2007
Resumen:
La diversidad genetica del HIV es uno de los tantos obstaculos para el desarrollo de una vacuna por lo que resulta necesario el analisis de la relevancia de la inmunidad subtipo especifica, utilizando inmunogenos que representen a poblaciones especificas. Este trabajo consistio en generar y caracterizar un vector basado en la cepa Western Reserve del virus Vaccinia, expresando la proteina gp160 de la CRF_12BF. Esto se logro por recombinacion homologa en el locus de HA de la cepa salvaje, infectando y transfectando con el plasmido de transferencia en cultivos de BSC-40. Se seleccionaron las placas de virus recombinante por la expresion del gen reportero b-GUS incorporado en la construccion, aislandolas y creciendolas en BSC-40 para su purificacion. Este vector fue caracterizado analizando la pureza por recuento en paralelo de placas de lisis vs placas B-GUS+ y por PCR. Se evaluo la expresion de gp160 por WB asi como su localizacion sub-celular por microscopia confocal, en diferentes lineas celulares. Finalmente, la estabilidad de la construccion se demostro por pasajes sucesivos y chequeo de la expresion, y la capacidad replicativa del vector, con respecto a la cepa salvaje, se comparo mediante curvas de crecimiento. CONCLUSION: La generacion de este vector permitira evaluar la importancia de la inmunidad especifica frente al intersubtipo BF en el desarrollo de futuras vacunas.
