DESARROLLO DE UN MODELO IN VITRO PARA EL ESTUDIO DE LOS EFECTOS DEL ESTRÉS SOBRE LA FUNCIÓN OVÁRICA BOVINA

LUCAS ETCHEVERS; MATIAS E. BELOTTI; AYELEN N. AMWEG

Jornada; Encuentro de Jóvenes Investigadores 2018; 2018

A diferencia de los esteroides sexuales y los GC, la ACTH ha recibido menor atención como moduladora de las funciones reproductivas. Aunque no ha sido demostrado que el ovario sea capaz de producir GC de novo, Amweg y col (2017) han demostrado la presencia del MC2R en el ovario bovino y además, que la ACTH tiene la capacidad de estimular la secreción de cortisol por la pared de los folículos ováricos. Estos resultados hallados en nuestro grupo de trabajo sugieren que la ACTH podría actuar en forma directa sobre el ovario regulando, en consecuencia, la esteroidogénesis, la ovulación, la función luteal y el desarrollo de la COD. Este panorama nos plantea la necesidad de desarrollar un modelo in vitro para poder estudiar en forma precisa el efecto local de la ACTH y del estrés sobre la función ovárica y sus distintos componentes.OBJETIVOS: 1-Optimizar cultivos primarios de células de la teca y la granulosa de folículos ováricos bovinos. 2-Optimizar la concentración de ACTH necesaria para generar un modelo de estrés en los cultivos primarios de células de la teca y de la granulosa, mediante la evaluación de la concentración de cortisol en los sobrenadantes del cultivo.En el presente trabajo, se logró la optimización de los cultivos primarios de células de la teca y de la granulosa provenientes de folículos antrales bovinos. El cultivo primario de células de la teca y de la granulosa, evidenció un tiempo de supervivencia de 96 y 48hs, respectivamente.Por otro lado, se realizó la evaluación de las poblaciones celulares mediante la expresión génica de las enzimas citocromo P450 aromatasa (CYP19A1) específica de células de la granulosa y citocromo P450 17 hidroxilasa/ 17, 20 liasa (CYP17A1) específica de células de la teca. Mediante esta técnica, se pudo validar la pureza de las poblaciones, descartando contaminaciones cruzadas entre las mismas.Finalmente, se evaluó la concentración de cortisol en los sobrenadante de los cultivos primarios estimulados con las diferentes concentraciones de ACTH, durante 12hs. En el caso de los cultivos de células de la teca, se observa una diferencia significativa (p0,05) para las diferentes concentraciones de ACTH evaluadas. Estos resultados indicarían que las concentraciones de estímulo ensayadas no serían suficientes para lograr cambios en la secreción de cortisol. En base a lo antes mencionado, nos planteamos el desafío de prolongar los tiempos de estímulo o probar otras concentraciones de ACTH.