Expresión de la enzima 11beta hidroxilasa (CYP11B1) en el ovario bovino: Implicancias de la síntesis local de cortisol.

AYELEN N. AMWEG; FERNANDA M. RODRIGUEZ; BELKIS MARELLI; FLORENCIA REY; NATALIA R. SALVETTI; HUGO H. ORTEGA

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2015

En respuesta al estrés, la adrenocorticotropina (ACTH) actúa sobre la glándula adrenal estimulando la síntesis y secreción de glucocorticoides (GCs), hormonas esteroides que actúan sobre el metabolismo intermedio, la respuesta inmunitaria e inflamatoria y la reproducción. Basados en evidencias de nuestro grupo, el objetivo del presente trabajo, fue evaluar la expresión y actividad de la enzima 11-beta hiroxilasa (CYP11B1) en el ovario bovino. Se realizó la evaluación de la expresión génica de CYP11B1 por PCR en Tiempo Real en células de granulosa y teca de folículos terciarios pequeños, medianos y grandes de animales en proestro. Además, se generó un anticuerpo policlonal purificado por cromatografía de afinidad, específico para la enzima CYP11B1, y se utilizó en western blot para confirmar la expresión proteica en muestras de pared folicular y de glándula adrenal. Además, se realizó un ensayo in vitro mediante cultivo de pared de folículos terciarios grandes, estimulados con ACTH en presencia de Metirapone, un inhibidor de la síntesis de GCs, para determinar la funcionalidad de CYP11B1. Se detectó la expresión génica de CYP11B1 en ambos tipos de células en los folículos analizados. Por western blot se obtuvo una banda a 48KDa, correspondiente a la enzima CYP11B1, confirmando la traducción del ARNm detectado por PCR. Por otro lado, se obtuvo una concentración aumentada de 17-hidroxiprogesterona y disminuida de cortisol en el medio de cultivo de las muestras estimuladas con Metirapone, indicando que la actividad de CYP11B1 estaría inhibida por el mismo. Estos resultados demuestran la presencia de la enzima CYP11B1 en el ovario bovino, confirmando que podría existir un mecanismo de acción directa del estrés a través de la síntesis local de GCs. Estas hormonas, a través de sus efectos antiinflamatorios, podrían estar implicadas en mecanismos reguladores relacionados con la ovulación, la esteroidogénesis ovárica y la función luteal.