Expresión de las isoformas tipo I y II de la enzima 11beta-Hidroxiesteroide Deshidrogenasa en las estructuras foliculares de bovinos con enfermedad quística ovárica

AMWEG, AYELEN N.; SALVETTI, NATALIA R.; PAREDES, ALFONSO; LARA, HERNÁN ; ORTEGA, HUGO H.

Jornada; XII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNR. Joranda Nacional de Divulgación Técnico Científica 2011 UNR-UNL.; 2011

La Enfermedad Quística Ovárica ha sido definida como una endocrinopatía progresiva, donde se produce un desequilibrio en el eje hipotálamo-hipofisario-ovárico, resultando en una falla en el mecanismo de ciclicidad reproductiva. La asociación entre la incidencia de la Enfermedad Quística Ovárica y las alteraciones endocrinas sugieren que el origen primario de este desorden podría estar a nivel hipotalámico y/o hipofisario. Los glucocorticoides actúan directamente sobre las células ováricas inhibiendo la acción de las gonadotrofinas y la síntesis de esteroides. Estas acciones son reguladas por la enzima 11beta-hidroxiesteroide dehidrogenasa (11beta-HSD). Dos isoformas de esta enzima han sido clonadas: 11beta-HSD-1 actúa predominantemente como una reductasa NADP(H) dependiente para generar cortisol activo o corticosterona, y 11beta-HSD-2 es una enzima NAD+ dependiente de alta afinidad que cataliza la inactivación enzimática de los glucocorticoides. En algunas especies se han determinado las bases moleculares de la transición de 11beta-HSD-2  a 11beta-HSD-1 durante la luteinización, concluyendo que la sobreexpresión de  esta enzima en el momento de la ovulación es inducida por las gonadotrofinas. Nuestra hipótesis se basa en que al ser la ovulación un evento inflamatorio caracterizado por un incremento en la síntesis de interleuquinas y prostaglandinas, la generación incrementada de glucocorticoides antiinflamatorios por la actividad de la 11beta-HSD-1 en el momento de la ovulación, podría representar un mecanismo fisiológico para limitar el proceso inflamatorio en el ovario que en algunos casos podría encontrarse exacerbado y bloquear la degradación preovulatoria de la pared folicular. En este sentido, se ha demostrado que los glucocorticoides inhiben la síntesis de prostaglandinas y citoquinas pro-inflamatorias en el ovario. El objetivo del presente trabajo fue determinar los perfiles de expresión in situ de las proteínas 11beta-HSD-1 y  11beta-HSD-2, relacionadas con el metabolismo de los glucocorticoides, en folículos ováricos bovinos. Para ello se utilizaron muestras de ovarios obtenidas en frigorífico, las que fueron fijadas en formol al 10% bufferado durante 8hs, lavándose luego en buffer fosfato salino y procesándose siguiendo protocolos de rutina para efectuar la inclusión en parafina. Luego, se efectuaron cortes seriados, de 4 mm de espesor, sobre los que se realizó una técnica inmunohistoquímica indirecta para la determinación de 11beta-HSD-1 y 11beta-HSD-2 utilizando anticuerpos específicos. Se realizó la recuperación antigénica y el bloqueo de la actividad de peroxidasa endógena y de las uniones inespecíficas. Se utilizó un anticuerpo secundario biotinilado. La reacción fue revelada utilizando 3,3´ diaminobencidina como cromógeno. Mediante análisis digital de imágenes, se evaluó la inmunomarcación en las tres capas foliculares (Granulosa, Teca Interna y Teca Externa) de folículos primarios, secundarios, terciarios, atrésicos y quistes, observándose inmunomarcación positiva de 11beta-HSD-1 y 11beta-HSD-2. La expresión de 11beta-HSD-1 fue significativamente mayor en folículos terciarios (14,858 ± 1,194) y quistes (13,236 ± 1,620) en células de la granulosa, con respecto a las demás estructuras foliculares (p<0.05). No se observaron diferencias significativas entre las distintas estructuras foliculares en células de teca interna y externa. La expresión de 11beta-HSD-2 fue significativamente mayor en folículos atrésicos (12,401 ± 1,715) y quistes (12,448 ± 0,984) en células de granulosa, como así también en folículos atrésicos (12,676 ± 1,869) y quistes (11,948 ± 1,231) en células de teca interna; mientras que en células de teca externa la expresión de 11beta-HSD-2  fue mayor en folículos atrésicos (13,352 ± 2,518) con respecto a las demás estructuras foliculares (p<0.05). Basados en estos resultados podríamos inferir que la activación local del cortisol influenciada por la enzima 11beta-HSD-1 en los folículos ováricos bovinos podría cumplir funciones importantes en la regulación de la función ovárica. Considerando que la ovulación se trata de un proceso inflamatorio mediado por interleuquinas y prostaglandinas, alteraciones en este mecanismo, tanto por el exceso de cortisol de origen adrenal o por el estímulo directo por ACTH en el ovario, podrían generar una acción antiinflamatoria local de tal magnitud que inhibiera el proceso de ovulación. Dado los intrincados mecanismos de regulación endócrina, parácrina y autócrina existentes en el ovario, pequeños cambios o alteraciones en los mecanismos de trascripción y/o traducción de esta enzima podrían ser cruciales en la patogenia de enfermedades que cursan con anovulación.