Modelo experimental para el estudio de la influencia de la irrigación folicular sobre el efecto de reCG y GnRH utilizadas durante el proestro en protocolos de IATF en vacas de cría.

MOLINA, M; FIOROTTO, B; ODRIOZOLA, ME; CAINELLI, S; SCHNEIDER, A; STASSI, AF; GAREIS, NC; SALVETTI, NR; AMWEG, AN; HUGO H. ORTEGA; DÍAZ, PU

Jornada; XI Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias.; 2023

El uso de la ultrasonografía Doppler (US Doppler) para el estudio del flujo sanguíneo del aparato reproductor en bovinos ha crecido sustancialmente. La determinación de la irrigación ovárica puede ser utilizada para identificar folículos y CL en desarrollo y para predecir el momento de ovulación o luteólisis2. El desarrollo del folículo preovulatorio está asociado con un incremento en la cantidad, tortuosidad y diámetro de sus vasos sanguíneos, teniendo la angiogénesis un papel importante en la selección del folículo dominante (FD)3. Por otra parte, para que la preñez se lleve adelante con éxito se dan coordinadamente interacciones complejas entre la síntesis y liberación de esteroides gonadales, la expresión de receptores de hormonas esteroides sexuales en el endometrio y las complejas interacciones entre factores de crecimiento locales secretados por el ovario y el útero4. En base a lo anteriormente descripto, planteamos como objetivo de trabajo evaluar el método de clasificación de FD según la irrigación de la pared folicular y el desarrollo de un modelo para estudiar la influencia de dicha irrigación sobre la dinámica folicular, las concentraciones hormonales y la expresión de receptores de hormonas esteroides y factores angiogénicos sobre la respuesta a la gonadotrofina coriónica equina recombinante (reCG) y la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH) en protocolos de IATF en vacas de cría. En el trabajo se incluyeron 48 vacas de raza Aberdeen angus, con ciclos estrales regulares, multíparas, sin cría al pie y con una condición corporal ≥ 2,5 (escala 1 a 5) en un protocolo de IATF a base de progesterona (P4) y 17-β estradiol (E2). El modelo experimental se resume en la Tabla 1. Brevemente, el día 7 del protocolo los animales se clasificaron en 8 grupos de 6 animales cada uno, según la irrigación de la pared del FD (“irrigado” y “no irrigado”) y los tratamientos hormonales adicionales que recibieron. Los animales de los grupos 1 y 2 recibieron 100 UI de reCG (Foli-Rec, Zoovet) el día 7. Los grupos 3 y 4 recibieron 10 µg de un análogo sintético de GnRH (Buserelina, Zoovet) el día 9. Los animales de los grupos 5 y 6 recibieron ambos tratamientos (reCG + GnRH). Finalmente, los grupos 7 y 8 no recibieron tratamientos adicionales. A través de la evaluación subjetiva del flujo sanguíneo mediate US Doppler se logró diferenciar aquellos folículos “irrigados” de los “no irrigados”. Además, se guardaron videos y se analizaron mediante el sistema Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic) para una evaluación semicuantitativa del flujo sanguíneo folicular a través de la determinación de la “región de interés” (ROI). Durante el proestro y estro se realizó US Doppler de los folículos preovulatorios, se determinó su diámetro y se tomaron muestras de sangre para la evaluación de concentraciones plasmáticas de P4 y E2. En el día 9 se tomó una muestra de líquido folicular mediante aspiración guiada por US del folículo preovulatorio, el cual se almacenó a -80 °C para futuras determinaciones hormonales y de factores angiogénicos. Luego mediante una pinza 10366L (Karl Storz) se obtuvieron biopsias endometriales del cuerno uterino ipsilateral al ovario donde se encontraba el FD, las cuales se procesaron mediante técnicas histológicas de rutina. Sobre estas muestras se realizó una tinción inicial con hematoxilina-eosina para determinar las características morfológicas del tejido y la presencia de endometritis subclínica mediante el conteo de células polimorfonucleares en el endometrio. Además, sobre cortes de estas muestras se realizará la técnica inmunohistoquímica indirecta para la detección de receptores de estrógeno ERα y ERβ y de factores angiogénicos y sus receptores. Los datos fueron evaluados a través del programa estadístico SPSS statistics versión 25 (IBM). Tanto el diámetro folicular como el área irrigada al día 7 fue evaluada a través de modelos lineales generalizados. Para la evaluación del área irrigada se consideró como covariable al diámetro folicular en el mismo día. En el día 7 del protocolo el diámetro folicular de los FD considerados como “irrigados” y “no irrigados” no presentó diferencias significativas entre grupos, siendo éste de 9,21 ± 1,68 mm y 8,99 ± 1,69 mm, respectivamente. En el análisis del área irrigada entre grupos observamos que los grupos 1 y 5 con FD irrigado presentaron mayor irrigación que los grupos 2, 4, 6 y 8 con FD no irrigados. Por su parte, el grupo 3 con FD irrigado mostró una tendencia a poseer mayor irrigación que el grupo 8. El grupo 7 con FD irrigado fue similar al grupo 8 y mostró mayor irrigación que el grupo 6 y una tendencia a poseer mayor irrigación que los grupos 2 y 4. Los grupos 2, 4, 6 y 8 con FD no irrigados no fueron diferentes entre si. En el análisis histológico de las muestras de biopsia se observó morfología conservada sin alteraciones de la arquitectura tisular y celular. Se evidenció la presencia de epitelio endometrial, glándulas superficiales y profundas. En una muestra perteneciente al grupo 3, se hallaron un número mayor a 3 células polimorfonucleares en el promedio de 10 campos de observación en 400X totales, considerándose este hallazgo como evidencia de endometritis y el animal fue excluido del ensayo. Estos resultados demuestran que la clasificación subjetiva de los FD considerando la irrigación es factible de realizarse a campo, y si bien se observan tendencias entre algunos grupos creemos que al aumentar el número de animales podremos diferenciar más eficientemente los grupos. En el futuro, estos trabajos permitirán obtener información relevante sobre la relación existente entre la irrigación del FD y las respuestas ovárica y endometrial al uso de hormonas comúnmente administradas durante el proestro (reCG y GnRH) en protocolos de IATF. La US Doppler podría ser una herramienta dentro de los programas reproductivos, favoreciendo un empleo más racional de las hormonas al permitir seleccionar aquellas que generen un ambiente más propicio para la fecundación y logro de una preñez exitosa.