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El análisis y caracterización de glicopéptidos obtenidos a través de la proteólisis de glicoproteínas aisladas de muestras biológicas complejas constituye un desafío importante, debido a la baja abundancia relativa de los glicopéptidos respecto a los péptidos no glicosilados, incluso aunque el material de partida sea una glicoproteína pura. Por este motivo, es importante el desarrollo y la optimización de metodologías que permitan enriquecer selectivamente los glicopéptidos presentes en la mezcla proteolítica, para identificar el sitio y tipo de unión de los glicanos (N-glicosilación u O-glicosilación) y determinar la estructura de dichos glicanos (híbridos, altos en manosa, complejos o sulfatados) por espectrometría de masa. Se utilizó clara de huevo dada su accesibilidad. Las proteínas se precipitaron con TCA al 50% y la visualización de las proteínas y glicoproteínas presentes se realizó por electroforesis en geles (SDS-PAGE). La banda de gel correspondiente a la ovoalbúmina (PM 45kDa) se escindió y se digirió con tripsina. La mezcla de péptidos y glicopéptidos obtenida fue sometida a diferentes métodos de enriquecimiento: a) Cromatografía líquida de interacción hidrofílica1, b) columnas de ác. fenilborónico (PBA)2, c) Columnas de intercambio iónico hidrofílicas 3 d) con el fin de determinar O-glicosilacion, la mezcla tripsinizada fue marcada por el método de BEMAD y los péptidos marcados se enriquecieron por thiol-sepharosa4. En cada caso, las fracciones percoladas y eluidas fueron comparadas por Cromatografia liquida de alta resolución utilizando una columna C:18 con un gradiente de acetonitrilo: agua. Los resultados muestran que el mejor método de enriquecimiento fue utilizando PBA, si bien los análisis de SAX también resultaron interesantes. Los péptidos marcados con BEMAD, fueron correctamente enriquecidos por thiol-Sepharose

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