Avances en el estudio de la O-glicosilación en las proteínas de clara de huevo

LANDONI, M.; RODRIGUEZ MN; COUTO AS

San Luis

Congreso; IV Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2022

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

La glicoproteómica, fusión entre la glicómica y la proteómica, intenta identificar las proteínas que se encuentran glicosiladas al mismo tiempo que busca determinar las estructuras de los glicanos que las modifican, los sitios de glicosilación y la ocupación de estos, para un determinado sistema. La inherente complejidad de los hidratos de carbono requiere el uso de diferentes técnicas, y la espectrometría de masa de alta resolución se ha convertido en la más útil. Anteriormente, en nuestro laboratorio, hemos caracterizado el N-glicoproteoma completo de la clara de huevo de Gallus gallus (CEW), mediante un análisis integrado que permitió elucidar en simultaneo los sitios de N-glicosilacion conjuntamente con la estructura de los glicanos asociados a cada péptido modificado1. En este trabajo, se avanza en el desarrollo de una metodología para el análisis del O-glicoproteoma de la CEW con el objeto de poder describir el glicoproteoma completo de un sistema complejo. Para ello, se realizó una precipitación con ácido tricloroacético (TCA) de las proteínas de la CEW. Las proteínas fueron posteriormente digeridas con tripsina. A continuación se realizó un enriquecimiento por cromatografía HILIC para obtener los glicopéptidos que fueron analizadas por nanoHPLC-ESI-Orbitrap. Las secuencias proteicas del proteoma de CEW se obtuvieron de la base de datos Uniprot (https://www.uniprot.org/). La búsqueda de los O-glicopéptidos fue realizada utilizando el programa GlycReSoft2. El análisis condujo a la identificación de 34 péptidos modificados con diferentes estructuras de O-glicanos pertenecientes a 6 proteínas. La información obtenida mediante este abordaje permite expandir la comprensión de funcionalidad, bioactividades y alergenicidad derivadas de las proteínas de CEW.