Interacción entre AIA y biofilm durante la formación de biofilm en Azospirillum brasilense.

FLORENCIA SALCEDO; LORENZO LAMATTINA; CECILIA CREUS

MAR DEL PLATA

Congreso; IV Congreso de Microbiología Agrícola Ambiental; 2018

Asociación Argentina de Micobiología, CAMAYA

Azospirillum brasilense pertenece al grupo de bacterias promotoras del crecimiento vegetal. Para la efectiva colonización de la raíz es necesaria la formación de un biofilm estable sobre la misma. Los mecanismos que regulan la formación de biofilm en Azospirillum no se conocen completamente. Sin embargo, se sabe que en sistemas in vitro el óxido nítrico (NO) regula la formación de biofilm en A. brasilense. Recientemente se ha reportado una interacción en el metabolismo de auxinas (AIA) y NO en A. brasilense cepa SM. El objetivo del trabajo fue estudiar la interacción entre AIA y NO en la regulación de la formación de biofilm de A. brasilense. Se utilizó A. brasilense Sp245 y sus mutantes isogénicas Faj164 (mutante napA, nitrato reductasa periplasmica nula) deficiente en la producción de NO, Faj009 (mutante en ipdC, piruvato decarboxilasa) deficiente en la síntesis de AIA, y A. brasilense Sp245-Rif (pOT1e-ppdC-egfp) que contiene un plásmido con el promotor del gen ipdC fusionado al reportero egfp. Las cepas se crecieron estáticamente en placas de 96 wells en medio NFb-NO3- con triptófano 100 µM, 2 días. Se determinó el crecimiento total espectrofotométricamente y la formación de biofilm con cristal violeta. La producción de AIA se estimó por el método Salkowsky, la concentración de nitritos (NO2-) se analizó usando un microelectrodo y la producción de NO fluorométricamente mediante la sonda específica DAF-2DA. Los resultados mostraron que Faj009 y Faj164 formaron menos biofilm que Sp245 a los 2 días. A este tiempo, el biofilm de Faj164 mostró menor contenido de AIA, mientras que el de Faj009 produjo menos NO2- y NO respecto de Sp245. El agregado exógeno de 1mM AIA disminuyó los biofilms de Sp245 y Faj009 y redujo la producción de NO2- y NO en los mismos. Por otro lado, el agregado del dador de NO (SNP) restituyó el biofilm en Faj164, no modificó el de Sp245 y Faj009, pero provocó una disminución de los niveles de AIA en el biofilm de Sp245. Por último, la actividad del promotor ppdC disminuyó frente al agregado de SNP mientras que el secuestrante especifico de NO (cPTIO) la incrementó. Los resultados indican que el NO es necesario para la formación de biofilm mientras que el AIA la disminuye. El AIA exógeno reduce la formación de biofilm afectando los niveles de NO. Asimismo, el NO modifica los niveles de AIA. Los resultados sugieren una interacción entre el AIA y el NO en la formación de biofilm de A. brasilense.