UTILIDAD DE LA PCR DE LA REGIÓN INTERGÉNICA DE MINI-EXÓN PARA LA DETECCIÓN DE TRYPANOSOMA CRUZI I EN MUESTRAS DE SANGRE

NICOLÁS TOMASINI; MARIA MERCEDES MONJE RUMI; JUAN JOSÉ LAUTHIER; PAULA G. RAGONE; ANAHÍ M. ALBERTI DAMATO; MIGUEL A. BASOMBRÍO; PATRICIO DIOSQUE

Rosario

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoologia

Trypanosoma cruzi, presenta un considerable polimorfismo genético. Una subdivisión en 6 linajes ha sido propuesta (TcI a TcVI). La identificación de los linajes de T. cruzi que circulan en diferentes áreas y hospedadores es importante para comprender el rol de los diferentes reservorios y vectores, como así también poder evaluar la posible influencia de los genotipos del parásito en las manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas. Nuestro grupo de trabajo, ha mostrado previamente que TcV se encuentra asociado a humanos, TcVI a perros y TcI principalmente relacionado a Didelphis albiventris en áreas rurales de la provincia de Chaco. Estos resultados fueron obtenidos a partir de aislados mediante Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE). Sin embargo, los linajes identificados podrían no representar la totalidad de clones presentes en cada hospedador debido a la selección de clones durante el proceso de cultivo. Particularmente, TcI fue aislado por nuestro grupo a partir de Triatominos del intra-domicilio en múltiples oportunidades y también ocasionalmente en perros. Sin embargo, no ha podido ser identificado en muestras de sangre humana. Técnicas de tipificación directa resultarían más adecuadas para estudiar el problema. La PCR de la región intergénica del gen mini-exón es una herramienta que muestra un particular interés para este propósito. Esto se debe a que esta región presenta múltiples copias en el genoma del parásito, permite identificar a TcI y mediante su secuenciación identificar distintos sub-grupos o genotipos dentro del linaje. En este trabajo se evaluó el límite de detección de la PCR de TcI, y de una variante de PCR semianidada, para diluciones seriadas en agua miliQ de cantidades conocidas de ADN de parásito, diluciones seriadas de ADN de parásito en muestras de sangre y diluciones seriadas de parásitos en sangre. Pudimos observar un límite de detección de 1 fg, similar al obtenido por PCR diagnóstica (primers 121-122). Considerando estos resultados, estamos evaluando la presencia de TcI en muestras de sangre positivas por serología provenientes de nuestra área de estudio, utilizando este marcador.