Análisis de la estructura génica y expresión de miostatina de pejerrey (Odontesthes bonariensis)

MARCHIONE VANINA; VILLANOVA GABRIELA VANINA; ARRANZ SILVIA EDA

Lavras

Congreso; III CONFERENCIA LATINOAMERICANA SOBRE CULTIVO DE PECES NATIVOS III CONGRESSO BRASILEÑO DE PRODUCCIÓN DE PECES NATIVOS; 2011

NAQUA

Miostatina (MSTN) es un miembro de la superfamilia de Factores de Crecimiento Transformante β (TGF-β), originalmente llamada Factor de Crecimiento y Diferenciación – 8 (GDF-8). Es un regulador negativo de la masa muscular y por ello presenta el potencial de ser un marcador de selección en la producción de animales de cultivo. El objetivo del presente trabajo fue la caracterización molecular del gen y del ARNm de miostatina de pejerrey, el estudio de la expresión del mismo en diferentes tejidos en peces adultos y el estudio de polimorfismos dentro de la secuencia génica como posibles marcadores asociados al crecimiento muscular. La amplificación del gen y del ADN complementario (ADNc) se realizó por amplificación por PCR y RT-PCR respectivamente, utilizando cebadores degenerados diseñados sobre las regiones más conservadas en las secuencias de miostatina de los peces teleósteos más cercanos evolutivamente. Los productos de amplificación fueron analizados por secuenciación. Se obtuvieron 2453 pares de bases (pb) que incluyen secuencias parciales del primer exón (97 pb), el intrón I (293 pb), el exón II (371 pb), el intrón II (766 pb) y parte del tercer exón (926 pb). El análisis por comparación de las secuencias proteicas de MSTN entre pejerrey (Atheriniforme) y Perciformes mostró un 91-95 % de identidad entre ellas. Se detectaron secuencias repetitivas de dinucleótidos en ambos intrones y en la región 3’ no traducible del tercer exón. Se diseñaron cebadores específicos para la amplificación por PCR de estas zonas repetitivas en diferentes individuos. El polimorfismo en esas tres regiones repetitivas fue analizado en 44 peces de cuatro poblaciones diferentes (14 de la laguna de Chascomús, 9 de la Estación Hidrobiológica de Chascomús y cuatro del IIB-INTECH, Chascomús, todos de la provincia de Buenos Aires, Argentina, 7 del río Paraná y 10 del río Uruguay). Los productos de amplificación obtenidos a partir del intrón I mostraron diferentes desplazamientos electroforéticos presentando una o dos bandas en geles de poliacrilamida desnaturalizantes teñidos con plata. Las secuencias de estos productos, así como los correspondientes al intrón II y al exón II están siendo analizadas. De esta forma podremos determinar la presencia de alelos diferentes en las poblaciones analizadas. El análisis de la expresión diferencial de miostatina en peces adultos (9.05 ± 1.24 cm de longitud estándar) se realizó mediante RT-PCR a partir de ARN total obtenido de diferentes tejidos. Se detectó la expresión de MSTN en el músculo esquelético, gónadas, piel y encéfalo posterior. El patrón de expresión observado difiere del de mamíferos, lo que sugiere una función adicional de MSTN en peces teleósteos. Los estudios aquí presentados proveen información para futuras investigaciones sobre el rol de MSTN en peces teleósteos y su posible utilización como marcador de selección de crecimiento. Palabras-clave: GDF-8, teleósteo, crecimiento, microsatélite, polimorfismo