Desacetilasas citoplasmáticas en Trypanosoma cruzi

ALONSO VICTORIA; RITAGLIATTI CARLA; VILLANOVA GABRIELA VANINA; SERRA ESTEBAN

Congreso; XXIV Reunión científica anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

Sociedad Argentina de protozoología

La acetilación de lisinas es una modificación postraduccional reversible y altamente regulada. Desde su descubrimiento en histonas hace más de 40 años, se han identificado diversas proteínas eucariotas acetiladas dentro y fuera del núcleo. En los últimos años se ha observado que la acetilación tiene un rol clave no sólo en la regulación de la transcripción sino también en diversos procesos citoplasmáticos. Las Histona Desacetilasas (HDAC), descriptas por su capacidad de modificar histonas, son enzimas capaces de desacetilar múltiples sustratos. Pueden clasificarse en clásicas (HDAC clase I, II y IV) y NAD-dependientes (deacetilasas clase III o sirtuinas), y han sido descriptas en diversos mecanismos, tanto nucleares como no nucleares. En particular, se ha reportado que en células de mamíferos la HDAC6 es la responsable de la desacetilación de la tubulina-α. La acetilación de esta proteína del citoesqueleto ha sido asociada a la dinámica de los microtúbulos, la movilidad y a la coordinación de diversos procesos celulares. También se han descripto desacetilasas NAD-dependientes citosólicas involucradas en la modificación de la tubulina-α. En Trypanosoma cruzi se han identificado cuatro secuencias codificantes homólogas a HDAC que podrían cumplir funciones citoplasmáticas. Con el objetivo de evaluar el rol de la acetilación en procesos citoplasmáticos en T. cruzi, se trataron cultivos de epimastigotes con inhibidores de desacetilasas. Se utilizó Trichostatina A, un inhibidor de deacetilasas clase I y clase II (donde está incluida HDAC6) y Nicotinamida, un inhibidor de las deacetilasas NAD-dependientes. Utilizando concentraciones micromolares de ambas drogas (IC50≈ 20 µM) se observó una disminución importante en el crecimiento de los epimastigotes de las cepas Cl Brener y Dm28c, mientras que, con concentraciones nanomolares se observaron alteraciones morfológicas marcadas, así como diferencias en los niveles de acetilación. Mediante Western Blot sobre extractos proteicos totales, se cuantificó el aumento de las proteínas acetiladas en forma global, y de la tubulina-α acetilada. Los cambios en los niveles de acetilación de la tubulina α, se corroboraron mediante inmunofluorescencia indirecta. Estos ensayos son un punto de partida para dilucidar el rol de las enzimas encargadas de la acetilación y desacetilación de proteínas no nucleares. Más experimentos se están llevando a cabo indagando sobre la función de esta modificación postraduccional en la dinámica de los microtúbulos en tripanosomátidos.