CALPAÍNA COMO FACTOR INTERMEDIARIO ENTRE LA ERITROPOYETINA Y LA PROTEÍNA TIROSINA FOSFATASA 1B

CALLERO MARIANA; VOTA DAIANA; CHAMORRO MARÍA EUGENIA; VITTORI DANIELA; NESSE ALCIRA

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La Proteína Tirosina Fosfatasa 1B (PTP1B) es una proteína involucrada en la atenuación de la vía de señalización de la eritropoyetina (Epo). Previamente, hemos demostrado que PTP1B es regulada positivamente por Epo en la línea celular eritroide UT-7, cuyo crecimiento depende totalmente de este factor de crecimiento. En este trabajo se estudió la modulación de esta fosfatasa en células UT-7 inducidas a hemoglobinización y en células TF-1, que responden a IL-3, GM-CSF y Epo. En ambas, se encontró, una regulación de PTP1B similar a la observada en las células UT-7 indiferenciadas a nivel de ARNm (PCR en tiempo real) pero a nivel proteico (Western blotting y citometría de flujo) no se observó disminución en el nivel de PTP1B en las células deprivadas de Epo o aumento de ella en las células estimuladas con este factor de crecimiento, sugiriendo que esta fosfatasa sería más resistente a degradación que en las células UT-7 indiferenciadas. Sin embargo, tanto en las células UT-7 hemoglobinizadas como en las TF-1 cultivadas en presencia de Epo de forma continua se detectó una forma adicional de la fosfatasa de peso molecular (46 kDa), distinta de la isoforma de membrana (50 kDa) y de la isoforma citosólica (42 kDa). Mediante fraccionamiento subcelular se determinó que la isoforma de 46 kDa permanece unida a la membrana del retículo endoplasmático, sugiriendo que proviene del clivaje de la isoforma de mayor peso molecular. Teniendo en cuenta que, en otros tipos celulares, se ha descripto a la PTP1B como sustrato fisiológico de la calpaína, se investigó su papel en esta regulación de PTP1B por Epo, mediante un protocolo de inhibición (calpeptina) y activación (ionóforo A23187) de esta proteasa calcio dependiente. De esta forma se concluyó que calpaína es el intermediario entre la Epo y la PTP1B en las células UT-7 diferenciadas y TF-1.