ESFEROCITOSIS HEREDITARIA (ESH): UTILIDAD DIAGNOSTICA DE DOS NUEVOS METODOS – CITOMETRIA DE FLUJO (CF) Y CRIOHEMOLISIS (CH) -, DE LAS PRUEBAS TRADICIONALES Y DE LA ELECTROFORESIS DE PROTEINAS DE MEMBRANA (SDS-PAGE)

CRISP, R; SOLARI, L; VOTA, D; VENEGAS, B; CHAMORRO, ME; GARCÍA, E; GAMMELA, D; MIGUEZ, G; SCHVARTZMAN, G; VITTORI, D; CALDAROLA, S; RICCHIERI, C; ALFONSO, G; NESSE, A; MARANGUNICH, L; DONATO, H

Congreso; XIX Congreso Argentino de Hematología; 2009

Sociedad Argentina de Hematología

En los últimos años la CF y la CH han sido propuestas como pruebas más sensibles y específicas que las tradicionales para diagnóstico de ESH, pero no hay experiencias comunicadas en nuestro país OBJETIVOS a) Evaluar utilidad de CF y CH; b) Establecer relación entre severidad clínica y resultados de las pruebas; c) Determinar prevalencia de cada deficiencia de proteína en nuestro país PACIENTES Y METODOS Se evaluaron 53 pacientes (edad 1 m - 77 a) - 22 con diagnóstico previo por métodos habituales -, 46 familiares asintomáticos y 220 controles normales. Se realizaron: hemograma, fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) basal y diferida, autohemólisis (AH), CH, CF con 5’eosina maleimida, y SDS-PAGE En CF se evaluó la disminución de la media geométrica de intensidad de fluorescencia (FCM) y el incremento de su coeficiente de variación (CV) respecto de 6 controles normales procesados simultáneamente. Los valores de corte para CF y CH se determinaron por el análisis de curvas ROC. Las deficiencias de proteínas de membrana se determinaron comparando con 6 controles normales corridos en el mismo gel. Criterios diagnósticos: a) ESH: 2 o más pruebas positivas; b) Portador sano: deficiencia de proteína con negatividad de las otras pruebas RESULTADOS Se diagnosticó ESH en 41 pacientes y 7 familiares; se detectaron 16 portadores sanos. Porcentajes de positividad de las pruebas: FOE 88%, AH 69%, CH 85%, CF 81% y SDS-PAGE 66%. Solo en 23 pacientes (56%) fueron positivas todas las pruebas. Considerando solo CH y CF, al menos una de ellas fue positiva en 94% de los casos Los valores de corte y porcentajes de sensibilidad y especificidad para CH y CF fueron: PRUEBA Valor de corte Sensibilidad (IC) Especificidad (IC) AUC (IC) CH (%) 2,8 80,9 (66,7-90,9) 95,5 (91,8-97,8) 0,94 (0,89-0,99) CF Δ FCM 17 69,8 (54,8-96,5) 96,5 (93,0-98,6) 0,90 (0,84-0,96) Δ CV 14 62,5 (47,4-76,1) 93,3 (88,9-96,3) 0,83 (0,75-0,90) La CF mostró valores significativamente diferentes en ESH leves que en las demás; en CH no se vieron diferencias En los pacientes, por SDS-PAGE se detectaron deficiencias de ankirina (8), espectrina (7), proteína 4.1 (5), proteína 4.2 (4), banda 3 (1), o ninguna deficiencia (10). La deficiencia fue aislada en 13 y combinada en 6 CONCLUSION CH y CF mostraron alta sensibilidad y especificidad diagnóstica. Sus ventajas son el escaso volumen de muestra requerida y la rapidez de obtención del resultado; además, la CH no requiere equipamiento específico. La incorporación de estas técnicas permite mejorar la eficacia diagnóstica. Las deficiencias predominantes fueron de ankirina y espectrina.