EFECTO DIFERENCIAL DE CITOQUINAS PROINFLAMATORIAS SOBRE CÉLULAS EN ETAPA DE DIFERENCIACIÓN ERITROIDE

VOTA DAIANA; CHAMORRO MARÍA EUGENIA; CALLERO MARIANA; NESSE ALCIRA; VITTORI DANIELA

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

SAIC

La anemia de enfermedades  crónicas se encuentra asociada a procesos inflamatorios caracterizados por la  producción aumentada de citoquinas proinflamatorias. En trabajos previos hemos  demostrado que la citoquina proinflamatoria TNF-alfa induce apoptosis de células  K562 cuando se encuentran en etapa de diferenciación eritroide. El objetivo del  presente trabajo es investigar si la IL-1beta produce el mismo efecto y avanzar en  el estudio de los mecanismos de acción de ambas citoquinas sobre células  diferenciadas.</p>              <p class="MsoNormal" style="text-align: justify;">La hemina (H) 30 µM resultó ser  un buen inductor de diferenciación eritroide, determinada por recuento  diferencial con tinción por DAF (57,0±5,6%, 48 h), proceso que no fue afectado  por TNF-alfa o IL-1beta. <span style="font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman";">La IL-1beta produjo, al igual que el TNF-alfa un efecto diferencial sobre la  línea celular K562. Mientras que la IL-1beta (30-100 µg/ml) incrementó la  apoptosis (Hoechst) de células diferenciadas, no afectó a las indiferenciadas  (H-IL 20,3±1,76%, IL 9,3±1,76%; P<0.05, n=3). Se corroboró que los efectos  observados fueron causados por la acción de la citoquina y no por la hemina  (H-IL 20,3±1.76%, H 11±1,73%; P<0.05, n=3). Los resultados de la actividad  de caspasa 3 (clivaje de Ac-DEVD-pNA) en tratamientos con TNF-alfa o con IL-1beta  concuerdan con los obtenidos por la técnica de Hoechst, confirmando la  inducción de apoptosis vía caspasas. La diferenciación eritroide fue acompañada  de una significativa disminución de los niveles de ARNm de c-FLIP, proteína  supresora de señales apoptótica, determinados por Real Time PCR (H 1,23±0,04  vs. C 0,77<0,04 u. a., P<0.001, n=4). Se puede concluir que el proceso de  diferenciación eritroide aumenta la sensibilidad de las células K562 a la  acción proapoptótica de distintas citoquinas producidas durante el proceso  inflamatorio. La disminución de la expresión de c-FLIP explicaría el efecto  atribuido a TNF-alfa y a IL-1beta en presencia de H, sugiriendo la participación de  c-FLIP en los mecanismos de la acción de las citoquinas proinflamatorias.