Efecto de la sobreexpresión del CBM del gen de expansina 1 (LeExp1) de Solanum lycopersicum en la maduración del fruto.

PERINI MAURO ALEJANDRO; SIN, IGNACIO NICOLAS; MARTINEZ, GUSTAVO ADOLFO; CIVELLO, PEDRO MARCOS

Jornada; VIII Jornadas Argentinas de Biología y Tecnología de Poscosecha 2015; 2015

Uno de los principales factores determinantes de la calidad y vida poscosecha de unfruto es su firmeza. La misma está condicionada por varios factores, siendo uno de losprincipales la rigidez mecánica determinada por la pared celular.Durante la maduración, intervienen numerosas enzimas y proteínas que degradan yremodelan la pared celular, y un aspecto común de la estructura de la mayoría deestas proteínas es su organización modular. Incluyen, típicamente, un dominiocatalítico característico de cada enzima y, uno o más dominios de unión acarbohidratos (CBM), unidos por una cadena poco estructurada. Un CBM se definecomo una secuencia contigua de aminoácidos dentro de una enzima activa sobrecarbohidratos, que posee un plegamiento característico y la capacidad de unirse alsustrato, aunque carece de actividad enzimática.En plantas, se ha informado la presencia de CBMs putativos en endoglucanasas ytambién en expansinas. Estas últimas, son proteínas carentes de actividad hidrolíticaconocida, pero pueden provocar la extensión de paredes celulares aisladas,probablemente por su hipotética capacidad para romper interacciones no covalentesentre hemicelulosas y celulosa. Asimismo, se ha postulado que su actividad provocauna relajación en la estructura de la pared, facilitando el acceso de otras enzimas asus sustratos. En tomate, la sobreexpresión de LeExp1 provocó un mayorablandamiento del fruto, mientras que la supresión del gen retrasó el ablandamiento.De esta manera, surgió la idea de elaborar una estrategia que permita controlar ladegradación de la pared celular y el ablandamiento de frutos, mediante lasobreexpresión de CBMs en la pared celular, empleando tomate como sistemamodelo.Se llevó a cabo el clonado de CBM-LeExp1 en tomate (Solanum lycopersicum var.Ailsa Craig). Para ello, se hizo uso del sistema Gateway®, usándose como vector deentrada al pDONR221 (Invitrogen). El vector de destino seleccionado fue elpK7WG2D.1. El mismo es un vector binario y se utiliza para generar unasobreexpresión de la proteína de interés. Por transformación vía Agrobacteriumtumefaciens y posterior cultivo in vitro se generaron líneas transformantes (generaciónF0).Para la caracterización preliminar de los frutos (generación F2), se cosecharontomates de líneas transgénicas y controles en el estadio verde maduro y se realizó unensayo poscosecha con los mismos. Se evaluó la coloración externa de los frutos conun colorímetro (Minolta CR300), y la firmeza empleando un texturómetro (TextureAnalyzer, TA.XT Plus) equipado con una sonda plana de 25 mm de diámetro. En esteúltimo ensayo, se registró la máxima fuerza desarrollada al comprimir el fruto hastaprovocar una deformación de 0,5 mm.En conclusión, las medidas de firmeza indican que los frutos sobreexpresantes delCBM-LeExp1 presentan una menor tasa de ablandamiento que los controles.