Obtención de plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana portadoras del gen LtNHX1

RUDI, J; AFFINITO, A; LÓPEZ MIRÓ, D; DECKER, V; MACIEL, M; DIAZ PALEO, A

Pergamino

Jornada; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores de la UNNOBA; 2019

UNNOBA

La salinidad afecta el crecimiento de las plantas debido a la reducción en su capacidad para absorber agua y a la acumulación excesiva de iones en los tejidos, especialmente Na+. NHX1 es un antiporter vacuolar que permite la compartimentalización de los iones Na+ en las vacuolas, disminuyendo su toxicidad en el citosol. Se conoce que la expresión modulada de NHX1 es importante en la tolerancia a salinidad de diversas especies, y que su expresión constitutiva en plantas transgénicas incrementa la tolerancia. El objetivo del trabajo fue obtener plantas transgénicas de Arabidopsis thaliana portadoras del gen NHX1 de Lotus tenuis, una especie forrajera tolerante a salinidad. Se realizó la transformación de A. thaliana mediante el método de inmersión floral con la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens que contiene un vector que permite la expresión del gen LtNHX1 bajo el control transcripcional del promotor constitutivo 35S, y confiere resistencia a glufosinato de amonio (PPT). Las plantas de A. thaliana crecieron en cámara de cría en el Laboratorio de Biotecnología de INTA Pergamino. En el estadio de floración, se realizó la inmersión en un cultivo de A. tumefaciens. Se realizó la cosecha de la generación T0 y se seleccionaron las plántulas en medio de cultivo con 10 ppm de PPT. Aquellas que lograron sobrevivir y crecer fueron pinceladas posteriormente con 100 ppm de PPT. Finalmente, se realizó extracción de ADN y amplificación mediante PCR de una región específica del transgén (547 pb). Se confirmaron 13 plántulas transgénicas T0 de un total inicial de 32 plántulas resistentes a 10 ppm de PPT. El protocolo de transformación empleado permitió obtener plantas transgénicas T0 cuya descendencia será seleccionada y evaluada en condiciones de salinidad para determinar la participación del antiporter NHX1 de L. tenuis en la tolerancia a la salinidad.