DESARROLLO DE UN MÉTODO POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE APAREAMIENTO IONICO CON DETECCIÓN DE ARREGLO DE DIODOS Y DERIVATIZACIÓN PRE-COLUMNA PARA LA DETERMINACIÓN DE GENTAMICINA EN CREMAS

MIRTA RAQUEL ALCARAZ; JUAN CARLOS ROBLES; MARÍA MERCEDES DE ZAN

Santa Fé, Argentina

Otro; II Encuentro de Jóvenes Investigadores de Universidades de Santa Fé; 2007

Universidad Nacional del Litoral

El sulfato de gentamicina es un antibiótico aminoglucosídico producido por la fermentación de Micromonospora purpurea. Es un importante agente antibacterial para el tratamiento de una gran variedad de infecciones por bacilos Gram-negativos y cocos Gram-positivos. Se utiliza en preparaciones como cremas, gotas e inyectables. Presenta cuatro componentes mayoritarios: C1, C1a, C2 y C2a y varios minoritarios como sisomicina, sagamicina (C2b) y dihidroxi-C2a. Estos compuestos poseen absorbancia casi nula en el espectro UV, por lo que no puede hacerse una determinación directa. En la bibliografía se encuentran varios métodos analíticos para su determinación, tales como: ensayo con enzimas inmunológicas, ensayos microbiológicos y cromatografía acoplada a espectrometría de masa, entre otros. Mientras que los primeros resultan muy laboriosos, insumen mucho tiempo de trabajo, aproximadamente dos días por muestra y tienen problemas de especificidad, el último es muy costoso e inaccesible para un laboratorio de mediana complejidad. En el presente trabajo se propone un método por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) con apareamiento iónico y derivatización pre-columna mediante 1,2.phtalaldeido (OPA) que permite detectar el analito en el U.V. La crema base (matriz) en la que está inmerso el sulfato de gentamicina es generalmente una mezcla compleja de excipientes que pueden interferir en la determinación. La utilización de un detector de arreglo de diodos (DAD) permite realizar una correcta identificación de los picos de interés, y obtener datos de segundo orden que pueden tratarse quimiometricamente para mejorar el rendimiento del método. Micromonospora purpurea. Es un importante agente antibacterial para el tratamiento de una gran variedad de infecciones por bacilos Gram-negativos y cocos Gram-positivos. Se utiliza en preparaciones como cremas, gotas e inyectables. Presenta cuatro componentes mayoritarios: C1, C1a, C2 y C2a y varios minoritarios como sisomicina, sagamicina (C2b) y dihidroxi-C2a. Estos compuestos poseen absorbancia casi nula en el espectro UV, por lo que no puede hacerse una determinación directa. En la bibliografía se encuentran varios métodos analíticos para su determinación, tales como: ensayo con enzimas inmunológicas, ensayos microbiológicos y cromatografía acoplada a espectrometría de masa, entre otros. Mientras que los primeros resultan muy laboriosos, insumen mucho tiempo de trabajo, aproximadamente dos días por muestra y tienen problemas de especificidad, el último es muy costoso e inaccesible para un laboratorio de mediana complejidad. En el presente trabajo se propone un método por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) con apareamiento iónico y derivatización pre-columna mediante 1,2.phtalaldeido (OPA) que permite detectar el analito en el U.V. La crema base (matriz) en la que está inmerso el sulfato de gentamicina es generalmente una mezcla compleja de excipientes que pueden interferir en la determinación. La utilización de un detector de arreglo de diodos (DAD) permite realizar una correcta identificación de los picos de interés, y obtener datos de segundo orden que pueden tratarse quimiometricamente para mejorar el rendimiento del método.