Modelado de datos de segundo orden generados a partir de cromatografia liquida de alta resolucion con deteccion de fluorescencia de barrido rapido para la determinacion de 7 fluoroquinolonas en agua residual, Exaltacion de fluorescencia por agregado de Y.

ALCARAZ, MIRTA RAQUEL; MONTEMURRO, MILAGROS; CULZONI, MARÍA JULIA; GOICOECHEA, HÉCTOR CARIMIRO

Montevideo

Congreso; 3er Congreso Uruguayo de Química Analítica; 2014

Facultad de Quimica - Universidad de la República - Uruguay

En este trabajo se presenta el desarrollo de un método por cromatografía liquida de alta resolución con detección de fluorescencia de barrido rápido combinado con resolución multivariada de curvas extendida mediante cuadrados mínimos alternantes (MCR-ALS extendido) para la cuantificación de 7 fluoroquinolonas en presencia de itrio (Y+3). El Y+3 en solución no presenta características fluorescentes, pero se ha demostrado que aumenta significativamente la fluorescencia nativa de ciertas fluoroquinolonas mediante la formación de complejos de coordinación [ ]. Las fluoroquinolonas utilizadas en este trabajo son ciprofloxacina (CPF), enrofloxacina (ENF), norfloxacina (NRF), ofloxacina (OFL), enoxacina (ENO), flumequina (FLU), sarafloxacina (SRF), danofloxacina (DNF) y difloxacina (DIF); todas ellas presentan fluorescencia nativa. La utilización de Y+3 incrementa la fluorescencia de estos analitos, disminuyendo así los límites de detección y cuantificación, llegando a límites comparables con métodos de mayor complejidad. En primer lugar, se evaluó espectrofluorimétricamente el efecto del Y+3 en la exaltación de la señal fluorescente de las fluoroquinolonas de interés 3, en un rango de pH de 4 a 9, como así también posibles corrimientos de los máximos de emisión y excitación de fluorescencia. La condición óptima fue aquella que generó tanto la máxima intensidad de fluorescencia para todos los analitos, como un corrimiento espectral que permita diferenciar aquellas fluoroquinolonas que presentan el mismo espectro (NRF, CPF y ENF por un lado, y SRF y DIF, por el otro). A continuación, se procedió a optimizar el sistema cromatográfico de manera tal de obtener la máxima resolución cromatográfica entre los analitos que presentan iguales espectros de emisión. El método cromatográfico se desarrolló en modo isocrático, utilizando una fase móvil de buffer Tris (20 mmol/L, pH=4, adicionado con Y+3 en una concentración de 1x10?4 mol L?1) /acetonitrilo/metanol. . Se trabajó a un flujo de 2.20 mL min?1 y a una temperatura de horno de columna de 40ºC. Se utilizó una columna Zorbax Eclipse C18 4.6 × 75 mm y 3.5 µm de tamaño de poro. A cada tiempo cromatográfico se registró el espectro de emisión en el rango entre 340 nm y 510 nm a una longitud de onda de excitación de 280 nm. Para la calibración, se prepararon estándares de cada una de las fluoroquinolonas en 5 niveles de concentración entre 0 y 90 ppb por triplicado, y para la validación, 12 mezclas de estándares de las 7 fluoroquinolonas en agua MilliQ por duplicado. Todas la muestras se prepararon transfiriendo cantidades adecuadas de cada analito a matraces de 5 mL, agregando 5 µL de Y+3 0.1 mol L?1 y llevando a volumen con agua MilliQ. Para cada muestra, se registraron matrices de tiempo-emisión de fluorescencia, generando datos de segundo orden que luego se analizaron mediante MCR-ALS extendido. El método desarrollado permitió cuantificar los analitos de interés en muestras de agua residual, en presencia de interferencias no modeladas, obteniendo límites de detección y cuantificación en el orden de ppt, sin necesidad de preconcentración.