CARACTERIZACIÓN DE LA ACTIVIDAD SUPRESORA Y DEL DOMINIO FBOX DE LA PROTEÍNA P0 DE LA VARIANTE ATÍPICA DEL COTTON LEAFROLL DWARF VIRUS (CLRDV-AT)

AGROFOGLIO, YC; DELFOSSE VC; CASSE, MF; HOPP, HE; BONACIC KRESIC, I; DISTÉFANO, AJ

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Asociación Argentina de Microbiología

El algodón (Gossypium spp.) representa una de las especies textiles de más amplia difusión como fuente de fibra natural y es un cultivo regional clave en el NEA. La enfermedad azul y la enfermedad azul atípica del algodón son las principales enfermedades de origen viral que afectan al cultivo en el país y causan importantes pérdidas económicas si no se emplean medidas adecuadas de control. Las enfermedades son provocadas por dos polerovirus muy relacionados filogenéticamente, el cotton leafroll dwarf virus (CLRDV) y el CLRDV-at, respectivamente. El CLRDV y el CLRDV-at presentan una alta identidad de secuencia entre la mayoría de sus proteínas (95%-98%), sin embargo presentan una diferencia del 88% en la secuencia de la proteína P0. Ambas proteínas P0 presentan actividad supresora de silenciamiento aunque la proteína P0 del CLRDV-at presenta una menor actividad supresora que P0 del CLRDV. La actividad supresora de silenciamiento de P0 del CLRDV está dada por la interacción, a través de su dominio F-Box (LPXXL/IX(10-13)P), con una subunidad fundamental del sistema multicomponente SCF E3 ubiquitina ligasa. Esa interacción produce la ubiquitinación de la proteína Argonauta 1 y su posterior degradación por una vía dependiente de autofagia. El dominio F-Box (LPXXIX(10-13)P) está presente en CLRDV y en otros miembros del género, y parcialmente en CLRDV-at, donde se encuentra mutado un aminoácido del dominio (LPXXVX(12)P). Con el objetivo de caracterizar si la mutación del dominio F-Box es responsable de la disminución de la actividad supresora de silenciamiento de la proteína P0 del CLRDV-at, se construyeron mutantes donde se sustituyó en la proteína P0 del CLRDV-at el residuo Valina por Isoleucina, recuperando el dominio consenso; y en la proteína P0 del CLRDV se mutó el residuo Isoleucina por Valina, obteniendo el dominio F-Box presente en la variante atípica. La actividad supresora fue evaluada en plantas de N. benthamiana línea 16c y, mediante la técnica de doble híbrido en levaduras, se evaluó la capacidad de interacción de las mutantes con la proteína del sistema SCF E3 ubiquitin ligasa de N. benthamiana (SKP1) y de G. hirsutum (GSK1).Ambas proteínas P0 mutantes mostraron mayores niveles de supresión que la proteína P0 de CLRDV-at, sin embargo no alcanzaron los niveles de la proteína P0 de CLRDV. Además, las proteínas analizadas no mostraron diferencias en la interacción con las proteínas SKP1 y GSK1 del sistema multicomponente SCF E3 ubiquitina ligasa. Estos resultados sugieren que las diferencias en la intensidad de supresión observada entre CLRDV y CLRDV-at son explicadas parcialmente por la mutación en el dominio F-Box, sugiriendo que hay otro u otros residuos involucrados en la actividad supresora.