Construcción de un clon infectivo del Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV, Polerovirus).

DISTÉFANO, A.J.; DELFOSSE, V.C.; CASSE, M.F.; HOPP, H.E.; BONACIC KRESIC, I; ZIEGLER-GRAFF, V

Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virología

El algodón es un cultivo regional clave en el NEA. La ?enfermedad azul? del algodón fue reportada en la Argentina durante la campaña agrícola 1982/83 y actualmente causa importantes pérdidas en el cultivo si no se implementan medidas adecuadas de control. La enfermedad es producida por el Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV) y el virus es transmitido en forma persistente, circulativa y no-propagativa por el pulgón del algodón Aphid gossypii Glover, no siendo posible su transmisión mecánica. Los síntomas característicos de la enfermedad son enanismo, enrollamiento de las hojas con textura coriácea y coloración verde oscura-azulada. El genoma del CLRDV fue recientemente secuenciado por nuestro grupo confirmando que el virus debe clasificarse como una nueva especie dentro del género Polerovirus (familia Luteoviridae). El CLRDV posee un genoma de RNA de simple cadena (ssRNA) positiva de 5,866 kb. Los viriones son icosahédricos, de aproximadamente 25 nm de diámetro, limitados al floema de su planta huésped. El objetivo del trabajo es desarrollar una estrategia alternativa de infección, mediante la obtención de un clon infectivo de cDNA del virus y un método eficiente de inoculación vía agroinfección, independizándose de la transmisión por el insecto vector. Este sistema es importante para el estudio de la expresión y función de los genes virales y de la replicación viral. Para la construcción del clon infectivo se obtuvieron clones parciales y redundantes de cDNA a partir del RNA viral por RT-PCR. Utilizando sitios de restricción internos en la secuencia viral se logró obtener la secuencia completa del cDNA (5,866 kb). El cDNA se colocó bajo el control del promotor 35S del Cauliflower mosaic virus (CaMV) y se agregó una secuencia final de polyA(15) para estabilizar el mensajero. Se secuenció la construcción (35S-CLRDV) para confirmar la integridad de la secuencia y se comprobó su transcripción en protoplastos de tabaco BY2. Para finalizar la construcción, la secuencia 35S-CLRDV se clonó en el vector binario T-DNA pBin19 en el sitio SalI. El vector recombinante pBin19/35S-CLRDV se introdujo por eletroporación en la cepa LBA4404 de A. tumefaciens. Para probar la funcionalidad del clon infectivo se realizaran ensayos de agroinfección en plantas de G. hirsutum susceptibles al virus y en N. benthamiana debido a que los Polerovirus tienen la capacidad de infectar plantas diferentes a sus huéspedes naturales cuando la infección se realiza a través de los clones infectivos.