Desarrollo y caracterización de un clon infectivo del Cotton leafroll dwarf virus de utilidad para el mejoramiento del algodón asistido por biotecnología.

DELFOSSE VC; CASSE, M.F.; HOPP, H.E.; BONACIC KRESIC, I; ZIEGLER-GRAFF, V; DISTÉFANO, A.J.

Buenos Aires

Simposio; RedBio Argentina; 2011

RedBio Argenina

El algodón es un cultivo regional clave en el NEA. La enfermedad azul es la principal enfermedad viral del algodón y causa importantes pérdidas en el cultivo. Es producida por el Cotton leafroll dwarf virus (CLRDV) y el virus es transmitido por el pulgón del algodón Aphid gossypii Glover, no siendo posible su transmisión mecánica. Los síntomas de la enfermedad son enanismo, enrollamiento de las hojas con textura coriácea y coloración verde oscura-azulada. El genoma del CLRDV fue recientemente secuenciado por nuestro grupo confirmando que el virus debe clasificarse como una nueva especie dentro del género Polerovirus (familia Luteoviridae). El CLRDV posee un genoma de RNA de simple cadena(ssRNA) positiva de 5,866 kb. El objetivo del trabajo es desarrollar una estrategia alternativa de infección, mediante la obtención de un clon infectivo de cDNA del virus y un método eficiente de inoculación vía agroinfección, independizándose de la transmisión por el insecto vector. Este sistema es importante para la evaluación de la resistencia al CLRDV en los programas de mejoramiento genético asistido, para la selección de genes de resistencia en el germoplasma de algodón. Para la construcción del clon infectivo se obtuvo la secuencia completa del cDNA viral por RT-PCR, se colocó bajo el control del promotor 35S del Cauliflower mosaic virus y se agregó una secuencia final de polyA(15) para estabilizar el mensajero. Se secuenció la construcción y se comprobó su transcripción en protoplastos de tabaco. Por último, la secuencia 35S-CLRDV se clonó en el vector binario pBin19 y el vector recombinante se introdujo en la cepa LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens. Para probar la funcionalidad del clon infectivo se realizaron ensayos de agroinfección en plantas de algodón susceptibles al virus. Se comprobó que el clon infectivo es capaz de establecer la infección, mostrando las plantas síntomas de infección por CLRDV.