Expresión dinámica de las caspasas en el cuerpo lúteo (CL) del ciclo natural del mono rhesus

PELUFFO, MC; YOUNG, KA; STOUFFER, RL

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Médicas (SAIC-SAI-SAFE-SAN-SABiología-SABiofísica-SAF); 2004

SAIC-SAI-SAFE-SAN-SABiología-SABiofísica-SAF

Las caspasas juegan un papel muy importante en laapoptosis. Nosotros proponemos que durante la formación y regresióndel CL, las caspasas estarían involucradas en el procesode reestructuración del mismo. Se recolectaron CL (n=3-4) demonas rhesus mediante una luteoctomía en las distintas etapasde la fase luteal (Temprana, día 3 post LH: ECL; Media, día 7:MCL; Media-Tardía, día 10: MLCL; Tardía, día 14: LCL; Muy-Tardía, día 18: VLCL). Se realizó RT-PCR o Real Time PCR decaspasa-2, -3, -8 y -9. Se extrajeron proteínas para medir la actividadde las 4 caspasas utilizando una placa con sustratofluorogénico específico para cada caspasa y para realizar unaELISA de la forma clivada de caspasa-3. Otras porciones del CLfueron fijadas para realizar inmunohistoquímica (IHC) paracaspasa-2 y -3 para medir apoptosis utilizando la técnica deTUNEL. Los niveles del mRNA de las 4 caspasas no mostrarondiferencias significativas (p>0.05) entre los distintos estadios.Mientras que en la actividad, se observó un aumento de 2 a 10veces en MLCL (p<0.05). Interesantemente, los resultados delELISA presentaron un patrón similar al de actividad, observándoseun aumento de 2-58 veces de expresión de la forma clivadade caspasa-3 en MLCL (p<0.05). En la IHC de caspasa-2 la marcase observó en las células granulosa-luteínicas, aumentandosu intensidad y cantidad en LCL y VLCL. En el caso de lacaspasa-3, se observó una abundante expresión durante la faselútea, detectándose un aumento en MCL y la aparición de marcaen el núcleo a partir de MCL. La marca se encontró en lascélulas granulosa- y teca-luteínicas. Los resultados del TUNELmostraron un aumento en el número de células apoptóticas apartir de MLCL en las células granulosa- y teca-luteínicas asícomo también en las células endoteliales. Se concluye que laapoptosis sería uno de los eventos tempranos en la regresióndel CL de primates. Y que la regulación de las caspasas en elCL de primates sería a nivel de traducción y/o activación y no anivel de transcripción.