Desarrollo de un ELISA competitivo indirecto multiespecie para la detección de anticuerpos totales contra el virus de la hepatitis E

ARCE, L.P.; PAVAN, M. F.; BOK, M.; PARREÑO, V.; GUTIERREZ, S.E.; ESTEIN, S.M.; TAMMONE, A.; CONDORÍ, WE; UHART, M.M.; VIZOSO PINTO, M.G.*; IBAÑEZ, L.I.*

Jornada; XL Reunión Anual de la Sociedad de Virología; 2022

*Estos autores contribuyeron de igual manera. Ambos son autores de correspondencia.El virus de la hepatitis E (HEV) es un virus zoonótico y emergente causante de hepatitis aguda. La serología para el HEV es de gran importancia tanto en estudios epidemiológicos como para controlar la transmisión de la enfermedad. Recientemente, obtuvimos nanoanticuerpos (VHHs) contra la proteína de cápside (ORF2) del HEV genotipo 3 (HEV-3) para desarrollar un ELISA competitivo (cELISA) que permita detectar inmunoglobulinas totales (Ig) de distintas especies animales.ORF2 HEV-3 fue expresada y purificada usando la resina NiNTA. Después de inmunizar una llama con ORF2 soluble, se construyó una librería de VHHs y se seleccionaron los VHHs específicos para ORF2 mediante la técnica de con de fago. Los VHHs anti-ORF2 fueron expresados en TG1, evaluados por ELISA indirecto y los clones positivos enviados a secuenciar. Se expresaron y purificaron VHHs anti-ORF2 seleccionados según la región hipervariable determinante de complementariedad 3 (CDR3). Se puso a punto el cELISA considerando: concentraciones de ORF2 y de VHHs, agentes bloqueantes, dilución de suero y de Ac secundario (anti-HisHRP). Para la validación del cELISA (, sensibilidad, especificidad, AUC, grado de concordancia, precisión y límite de detección) se empleó un panel de sueros caracterizados con el kit DIAPRO. Finalmente, se analizaron 62 muestras de pacientes con hepatopatías y sueros de diferentes animales: cerdo, jabalí, ciervo y ratón.De los 6 VHHs anti-ORF2, se seleccionó el VHH11 y se establecieron las siguientes condiciones para el cELISA: ORF2 HEV-3 0,05 g/ml, VHH11 60 ng/ml, suero sin diluir, leche 5% (agente bloqueante) y dilución del Ac conjugado 1/10000. Mediante análisis ROC (Característica Operativa del Receptor) calculamos una sensibilidad de 97,4 %, especificidad 95,8 %, de 69,16% y buena capacidad discriminativa debido a su AUC (área debajo de la curva) de 0,976. La variabilidad intra e interensayo calculado mediante el coeficiente de variación (CV) fue < 10% y