Expresión diferencial de trans-sialidasa por distintas cepas de Trypanosoma cruzi. Relación con la evolución de la infección

RISSO MARIKENA; GARBARINO GLORIA; MOCCETTI E; GONZÁLEZ CAPPA STELLA M; CAMPETELLA OSCAR; LEGUIZAMÓN M SUSANA

La Habana, Cuba

Congreso; XVI Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2002

Asociación Latinoamericana de Microbiología

Durante la fase aguda de la infección, T. cruzi induce depleción tímica transiente, principalmente en la corteza, que se evidencia por disminución de la subpoblación CD4+CD8+ y modificaciones de la histoarquitectura del órgano que revierten hacia la fase crónica. En nuestro laboratorio encontramos además que la trans-sialidasa (TS) induce apoptosis de células del sistema inmune en bazo, ganglio y timo, y que al inocular TS activa se mimetiza la involución tímica observada en la infección. La actividad de TS se detecta en circulación en ratones infectados con la cepa RA, que mueren antes de producir anticuerpos neutralizantes (AcNt). Sin embargo, en ratones infectados con una cepa de menor virulencia que induce infección crónica no se detecta actividad de TS, pero sí estos AcNt . Con el fin de estudiar la expresión diferencial de TS entre cepas de diferente virulencia y su relación con el impacto en timo, analizamos la producción y liberación (“shedding”) de TS en cepas virulentas y poco virulentas para el ratón así como la celularidad, proporción de subpoblaciones, histopatología y apoptosis en timo, relacionando estos datos con los niveles de parasitemia y la producción de AcNt. Al comparar la expresión de TS entre cepas de distinta virulencia para el ratón, encontramos que a igual cantidad de tripomastigotes sanguíneos de las cepas virulentas Tulahuén y RA producen y liberan al medio cantidades significativamente superiores de enzima activa respecto de las menos virulentas K-98 y AC. El impacto tímico en ratones infectados con cepas de diferente producción/liberación de TS, se realizó empleando K-98 (poco virulenta) y RA (alta virulencia). La proporción de las subpoblaciones de timocitos se estableció utilizando anticuerpos monoclonales -CD4-PE y -CD8-FITC y se analizó por citometría de flujo. A diferencia de lo descripto para la cepa letal RA, la celularidad total y los porcentajes de la subpoblación CD4+CD8+ no difieren respecto de los normales. Se analizaron cortes de timo de ratones infectados con K-98 obtenidos a diferentes tiempos post-infección y teñidos con hematoxilina/eosina. A los 11 días pi se conserva la histoarquitectura y sólo se observan núcleos de reducción celular focalizada, sin afectar la corteza tímica en su totalidad. A los 30 días pi, simultáneamente con la aparición de AcNt en circulación, dichas lesiones remiten. En cambio, en la infección por RA se observa a los 12 días pi la alteración del órgano por reducción de la corteza. En ensayos de TUNEL-peroxidasa sobre cortes de timo de ratones infectados con K-98 se observan escasos campos con células positivas focalizadas (6-8/campo, 40X) en tiempos tempranos (11 días pi), mientras que a 30 días pi remiten a valores normales (0-1/campo, 40X). La menor producción/liberación de TS por K-98 sumada a la parasitemia tardía y a la inducción temprana (21 días pi) de AcNt de la actividad de TS hacen que el impacto sobre timo sea sensiblemente menor respecto de la cepa virulenta. Hemos comunicado que niveles de TS activa, indetectables en circulación, son capaces de inducir apoptosis en timo. En la infección murina por K-98 las alteraciones histológicas tempranas se deberían a cantidades mínimas de TS que no aumentarían dada la aparición de AcNt paralelamente al pico de parasitemia, de modo que, a los 30 días pi las alteraciones revierten, colaborando así a alcanzar la fase crónica de la infección.