Análisis de la expresión del hemaglutinina del virus del sarampión en un sistema de generación de VLPs impulsado por la proteína Z del Virus Junín

AF DE GANZÓ , AL BELIZAN , CS BORIO , MS COLLADO , MH ARGÜELLES , SE GOÑI , ML LOZANO

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología, II Congreso Latinoamericano de Virología IV, Simposio de Virología Clínica II, Simposio de Virología Veterinaria ?Dr. José L. La Torre?; 2015

La proteína Z de los arenavirus presenta tres dominios principales: una región amino terminal que contiene la señal para la modificación por miristoilación y anclaje a membrana; un dominio RING central y una región carboxilo terminal en la cual se identificaron dominios tardíos (LD, Late Domains) altamente conservados en proteínas matriz virales. Los LD poseen la capacidad de interaccionar con componentes de la maquinaria celular de direccionamiento proteico vacuolar quemedian el tránsito endosomal, e iniciar el proceso de brotación viral. Esta capacidad de dirigir el proceso de brotación es autónoma incluso en ausencia de otras proteínas del virión, siendo útil para generar partículas tipo virales (VLPs, Virus-Like Particles). Las VLPs son de utilidad como herramienta biotecnológica debido a su estructura y morfología: están formadas por proteínas estructurales con capacidad de autoensamblarse e imitar la estructura viral, carecen de infectividad al no poseer genoma y son capaces de brotar de manera autónoma. Asimismo, las VLPs derivadas de virus envueltos se presentan como una alternativa segura y eficiente para vehiculizar antígenos de naturaleza proteica. En trabajos previos en nuestro laboratorio se ha demostrado que la proteína Z del virus Junín fusionada a la proteína fluorescente verde (GFP, Green Fluorescent Protein) conserva la capacidad de brotación autónoma en sistemas de expresión eucariota (mamíferos e insectos) y que las VLPs producidas estimulan una respuesta inmune en ratones inoculados.Las construcciones diseñadas en este trabajo incluyen el clonado de las proteínas Z y la hemaglutinina del virus del sarampión (HA) en vectores individuales, una fusión entre ambas en un único plásmido y el clonado del ectodominio de la HA (ETD-HA) en un vector presentador de antígenos en proceso de diseño en nuestro laboratorio. Luego de los ensayos de transfección y co-transfección transitoria, se sometieron las monocapas de cultivo a ensayos de inmunodetección con anticuerpos específicos a fin de evaluar la expresión de las diferentes variantes. Además, para comprobar la capacidad de este sistema de generar VLPs quiméricas, se ultracentrifugó el sobrenadante de cultivo y se sometieron las diferentes muestras a ensayos de inmunodetección con anticuerpos específicos idénticos a los utilizados en las monocapas respectivas.Estos ensayos dieron como resultado la detección de diferentes proteínas heterólogas conteniendo Z y HA, tanto en las monocapas de cultivos como en los sobrenadantes.Los resultados preliminares confirmarían que la capacidad de la proteína Z de dirigir el proceso de brotación se conserva aún en fusiones proteicas que incluyen no solo eGFP sino también proteínas virales con propiedades antigénicas y, sumados a ensayos de inmunización exitosos en animales de laboratorio, permitirían iniciar el desarrollo de una herramienta biotecnológica para ensayar la vehiculización de antígenos de importancia epidemiológica.