Vehiculización del dominio CD4 de la proteína VP6 de rotavirus en un sistema de generaciónde VLPs impulsado por la proteína Z del virus Junín

DE GANZÓ, AF; BORIO, CS; BILEN, M; COLLADO, MS; GOÑI SE; ARGÜELLES, MH; GLIKMANN, G; LOZANO, ME

Buenos Aires

Otro; XXXIII Reunión Científica Anual  Sociedad Argentina de Virología  División de la   Asociación Argentina de Microbiología ; 2013

Sociedad Argentina de Virología

La proteína Z de los arenavirus presenta tres dominios principales: la región amino terminal contiene la señal para la modificación por miristoilación y anclaje a membrana; la región central en forma de dominio <ZincFinger>; y la región carboxilo terminal en la cual se identificaron dominios tardíos (LD, <Late Domains>)altamente conservados en proteínas de matriz virales. Los LD poseen la capacidad de interaccionar con componentes de la maquinaria celular de direccionamiento proteico vacuolar que median el tránsito endosomal (ESCRT-I, <Endosomal Sorting Complex Required for Transport-I>) e iniciar el proceso de brotación viral. Esta capacidad de dirigir el proceso de brotación es autónoma incluso en ausencia de otras proteínas del virión, siendo útil para generar partículas tipo virales (VLPs, <Virus-Like Particles>). Las VLPs son de utilidad como herramienta biotecnológica debido a su estructura y morfología: están formadas por proteínas estructurales con capacidad de autoensamblarse e imitar la estructura viral, carecen de infectividad al no poseer genoma y son capaces de brotar de manera autónoma. Asimismo, las VLPs derivadas de virus envueltos se presentan como una alternativa segura y eficiente para vehiculizar antígenos de naturaleza proteica. En trabajos previos en nuestro laboratorio se ha demostrado que la proteína Z del virus Junín fusionada a la proteína fluorescente verde (GFP, <Green Fluorescent Protein>) conserva la capacidad de brotación autónoma en sistemas de expresión eucariota (mamíferos e insectos) y que las VLPs producidas estimulan una respuesta inmune en ratones desafiados. En este trabajo se ensayó la capacidad de Z del virus Junín de generar VLPs fusionada al antígeno CD4 de la proteína VP6 de rotavirus. Las construcciones diseñadas implican fusiones entre Z, CD4 y eGFP como proteína indicadora y se espera que las VLPs generadas contengan en su interior la proteína recombinante Z-CD4 o Z-CD4-eGF. Para evaluar la expresión e integridad de las VLPs en células HEK 293T/17, se realizaron ensayos de transfeccion transitoria seguido de inmunodeteccion con anticuerpos específicos y ensayos de protección a proteasas. Asimismo, mediante microscopia de fluorescencia, fue posible visualizar la expresión de Z-CD4-EGFP. Estos resultados confirmarían que la capacidad de la proteína Z de dirigir el proceso de brotación se conserva aún en fusiones proteicas que incluyen no solo eGFP sino también antígenos virales de reducido tamaño y, sumados a ensayos de inmunización exitosos en animales de laboratorio, permitirían iniciar el desarrollo de una herramienta biotecnológica para ensayar la vehiculización antígenos de importancia epidemiológica.