Estudio de las capacidades de degradación de hidrocarburos en cepas patagónicas oleaginosas.

SILVA R.A.; RAMIREZ M.V.; NAVARRO V.; FARÍAS M.E.; FERRERO M.; ALVAREZ H.M.

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano (ALAM) y X Congreso Argentino de Microbiología (AAM).; 2004

El estudio de comunidades bacterianas de ambientes contaminados y de sus capacidades genéticas, bioquímicas y fisiológicas de adaptación al medio y para la degradación de contaminantes, favorece su utilización en técnicas de biorremediación. Estudios previos del grupo han demostrado que las bacterias que acumulan lípidos neutros como reserva energética en condiciones desbalanceadas (oleaginosas), poseen un amplio espectro metabólico y capacidad de supervivencia en el ambiente, por lo que serían candidatas en dichas técnicas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar las capacidades degradativas de microorganismos oleaginosos de la Patagonia semiárida a fin de obtener información básica sobre los mismos, en función del uso potencial de éstos en técnicas de saneamiento ambiental. La selección de este tipo de bacterias se realizó mediante tinción de colonias con un colorante lipofílico y confirmación mediante cromatografía en capa delgada frente a estándares de triglicéridos y ceras. Para el estudio de utilización de hidrocarburos se cultivaron las células en medio mineral sólido suplementado con la fuente de carbono durante 7 días mínimo. Se investigó la presencia de plásmidos mediante lisis alcalina y posterior electroforesis en gel de agarosa. En este trabajo se realizaron 7 muestreos simples al azar de diferentes ambientes terrestres y acuosos, a partir de los cuales se aislaron 162 cepas bacterianas y se seleccionaron cuatro, de acuerdo a su capacidad de acumulación de lípidos neutros. Las cepas se denominaron N, Kb, ODA5 y 534. Las cuatro cepas mostraron un perfil de degradación similar, utilizando gas-oil, hexadecano, octadecilamina, 3-ciclohexilpropiónico, valerato, acetato, benzoato y octanoato de sodio como fuentes de carbono. Ninguna de las cepas estudiadas fue capaz de crecer con benceno, tolueno, xileno y nafta. Las cepas ODA5 y la N fueron capaces de crecer con escualeno y naftaleno como únicas fuentes de carbono, a diferencia de las cepas 534 y Kb. Las cepas N y ODA5, Gram (-), serían Acinetobacter y Pseudomonas, respectivamente; mientras que las cepas Kb y 534 serían Gram (+) del tipo de los Actinomycetes. Análisis de secuencias del DNA 16S ribosomal se están llevando a cabo para su identificación definitiva. El estudio de plásmidos reveló al menos tres en la cepa 534, mientras que ODA5 y Kb presentaron un perfil plasmídico idéntico formado por al menos dos plásmidos de alto PM, uno de mediano y otro de bajo. Se están realizando los perfiles de restricción de éstos para confirmar su similitud ya que podría tratarse de un sistema promiscuo de dispersión capaz de establecerse tanto en Gram (+) como en Gram (-); y experimentos de curado y conjugación para determinar si los fenotipos estudiados están asociados a estos plásmidos. En función de los resultados obtenidos, se está determinando la existencia de genes que codifiquen para actividades degradativas de hidrocarburos, alifáticos y/o aromáticas, así como la codificación plasmídica o cromosomal de las mismas. Los resultados preliminares sugieren que las cuatro cepas tendrían un espectro amplio de degradación de hidrocarburos, principalmente de aquellos con cadenas alifáticas. La no utilización de hidrocarburos monoaromáticos volátiles se debería a un efecto tóxico y no a la falta de las enzimas catabólicas respectivas.