Validación de ELISA IBR para detección de anticuerpos contra

ROMERA, ALEJANDRA; PARREÑO, VIVIANA; MAKEK, LUCIA; RODRIGUEZ, DANIELA; MALACARI, DARIO; MAIDANA, SILVINA; COMPAIRED, DIEGO; LOPEZ, VIRGINIA; MARANGUNICH, LAURA

Capital federal-Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

La validación del ensayo para identificar sueros de bovinos y cobayos positivos y negativos para anticuerpos (Acs) contra IBR se estableció mediante el cálculo de su especificidad (EsP) y Sensibilidad (SeD) diagnósticas, utilizando un set de muestras positivas y negativas definidas como población de referencia. Se calculó su especificidad y sensibilidad relativas (EsR y SeR) respecto de la seroneutralización, considerada como técnica Gold Standard. A su véz se calculó la correlación entre el título de Acs neutralizantes y el título de Acs por ELISA mediante un análisis de regresión lineal. También se calculó la repetibilidad y la linealidad.Cobayos: Se utilizaron 263 sueros de cobayos, 128 sueros de animales vacunados, con vacunas experimentales y vacunas oleosas o acuosas disponibles en el mercado que contienen BoHV-1 en su formulación (n:13). Se utilizaron 135 sueros de cobayos negativos. Bovinos: Para determinar la correlación entre título de Acs por ELISA y título Acs neutralizantes se evaluaron 412 sueros de bovinos prevacunados y postvacunados (60dpv) con vacunas oleosas conteniendo BoHV-1 en su formulación. Previamente para determinar el punto de corte (PC), la sensibilidad y la especificidad, se habían evaluado 39 sueros positivos y 93 sueros negativos a BoHV-1. Respecto del IBR ELISA Bovino cuyo PC se había establecido en 40%, la SeR y EsR fueron de 89.74 y 100% respectivamente. Los ensayos para calcular la repetitibilidad con corridas históricas del control positivo C+ y otras especialmente diseñadas para ésta validación, arrojó un 5.8% de variación relativa del C+ dentro de una misma placa, de 13.8% entre placas dentro de un mismo ensayo y la variación entre ensayos realizados en diferentes días representó un 18.2% de la variación relativa total que fue del 23,6%. Existe buena correlación entre título de Acs neutralizantes y el título de Acs determinados por el IBR ELISA (Coef Pearson: 0.72; R2: 0.85) para el suero de un mismo individuo obtenido a los 60 dpv. Se comprobó que el método se comporta en forma lineal.0Respecto del IBR ELISA Cobayo se estableció el PC en 37-39% arrojando una sensibilidad y especificidad diagnóstica del 99%. Existe una muy buena correlación entre título de Ac neutralizantes y el título de Ac determinado por el IBR ELISA (Coef Pearson: 0.92; R2: 0.83) para el suero de un mismo individuo obtenido a los 30 dpv. La precisión total del ensayo es de 23% resultando un 9.3% de la variación total la debida a las repeticiones del control en una misma placa, 17.3% entre placas de un mismo ensayo y 9.3% entre ensayos de diferentes días. Se confirmó que el método se comporta en forma lineal. Se logró establecer el PC para el IBR ELISA cobayo y el PC previamente establecido para el IBR ELISA bovino se utilizó para determinar la repetitibilidad del ensayo en corridas históricas y otras diseñadas para este estudio.